【摘 要】
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目的探讨枸杞多糖减轻绿脓杆菌毒素(Pyocyanin,PCN)对小鼠巨噬细胞RAW264.7氧化损伤机制。方法细胞分为对照组(未处理组),绿脓杆菌毒素处理组,枸杞多糖处理组及枸杞多糖+绿脓
【机 构】
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宁夏大学生命科学学院西部特色生物资源保护与利用教育部重点实验室;
【基金项目】
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国家自然科学基金项目(No.31772710);宁夏回族自治区重点研发项目(No.2017BN04);宁夏高等学校一流学科建设(生物学)资助项目(No.NXYLXK2017B05);宁夏回族自治区自然科学基金项目(No.2018AAC03173);中科院"西部之光"计划(No.XAB2017AW08)
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目的探讨枸杞多糖减轻绿脓杆菌毒素(Pyocyanin,PCN)对小鼠巨噬细胞RAW264.7氧化损伤机制。方法细胞分为对照组(未处理组),绿脓杆菌毒素处理组,枸杞多糖处理组及枸杞多糖+绿脓杆菌毒素处理组,通过细胞MTT法检测绿脓杆菌毒素处理后枸杞多糖对小鼠巨噬细胞RAW264.7活性的保护作用;采用Western blot检测不同处理组细胞凋亡相关蛋白的表达;采用荧光染色法检测ROS的表达;采用ELASA法检测不同时间点细胞上清中IL-4的表达;采用流式细胞仪检测不同处理组细胞凋亡情况。结果 50μmol/L PCN处理后导致细胞增殖能力下降,凋亡抑制蛋白Bcl-xl表达量下调,ROS表达量上升(t=3.95,P<0.05)。随着处理时间的延长,PCN能够刺激细胞促炎因子IL-4过量表达,促进巨噬细胞细胞凋亡(t=7.15,P<0.05)。100 mg/ml LBP预处理RAW264.7细胞可显著促进Bcl-2(t=1.24,P<0.05)和Bcl-xl的表达(t=1.51,P<0.05),促炎因子IL-4和胞内ROS的表达显著下调(t值分别为8.15和2.57,均P<0.05),并PCN造成的巨噬细胞凋亡减少。结论 LBP可抑制PCN造成的胞内ROS产生,抑制IL-4释放,调控凋亡抑制蛋白Bcl-2、Bcl-xl和凋亡蛋白Caspase3的表达,进而提高PCN作用后RAW264.7细胞的增殖能力,为进一步研究绿脓杆菌致病机制及LBP的免疫保护作用提供了理论基础。
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