【摘 要】
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目的利用人脐血CD34+干细胞诱导分化树突状细胞(DC),并对DC分化发育过程的生物学特性进行鉴定和分析。方法通过SCF、GM-CSF、TGF-β1、F lt-3L及TNF-α体外培养体系,从脐血CD
【机 构】
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上海交通大学医学院瑞金医院肾内科,上海交通大学医学院上海市免疫学研究所
【基金项目】
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国家自然科学基金(39970340,30570865);上海市自然科学基金(02ZBl4041,034119916)
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目的利用人脐血CD34+干细胞诱导分化树突状细胞(DC),并对DC分化发育过程的生物学特性进行鉴定和分析。方法通过SCF、GM-CSF、TGF-β1、F lt-3L及TNF-α体外培养体系,从脐血CD34+造血干细胞中诱导扩增获得DC。采用倒置显微镜和电镜观察DC形态学特征,流式细胞仪检测DC细胞表型及胞内活性氧(ROS)水平,MTT比色法检测DC刺激同种异体T细胞增殖能力;ELISA法检测DC培养上清液中IL-12含量。结果CD34+细胞培养5至7 d,细胞呈现DC典型树突状形态,处未成熟状态,再经TNF-α诱导及继续培养至14 d,DC发育成熟。未成熟DC表达模式识别受体CD209(DC-SIGN),且胞内蓄积适量ROS,具备了细胞吞噬能力。成熟DC除仍高表达DC-SIGN,其表面黏附共刺激分子CD llc、CD54、CD83、CD80、CD86表达上调,细胞因子IL-12分泌增加,且具明显的体外刺激T细胞增殖能力,符合于抗原递呈细胞特征。此外,未成熟和成熟DC基本不表达黏附分子P-、E-选择素,但未成熟和成熟DC分别高表达和低表达L-选择素。结论建立人DC体外模型及其分化发育生物学特性分析,为进一步研究DC功能,以及利用DC调控免疫应答用于疾病防治提供了基础。
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