【摘 要】
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猪δ冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)是一种新出现的猪(Sus scrofa)肠道致病性冠状病毒,可导致哺乳仔猪严重脱水、呕吐及水样腹泻,在全球范围内广泛分布.为建立一种快速检测PDCoV抗体的间接ELISA方法,本研究利用生物信息学方法分析M蛋白的基因序列特性,设计并扩增PDCoV的M基因序列76～651 bp区域,与表达载体pET-32a构建重组质粒,转化大肠杆菌(Eschierichiia coil)Transetta(DE3)进行诱导表达,获得截短表达的M蛋白
【机 构】
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四川农业大学动物医学院猪病研究中心,温江611130;四川农业大学动物医学院猪病研究中心,温江611130;农业农村部兽用药物与兽医诊断技术四川科学观测实验站,温江611130;四川农业大学国家级动物
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猪δ冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)是一种新出现的猪(Sus scrofa)肠道致病性冠状病毒,可导致哺乳仔猪严重脱水、呕吐及水样腹泻,在全球范围内广泛分布.为建立一种快速检测PDCoV抗体的间接ELISA方法,本研究利用生物信息学方法分析M蛋白的基因序列特性,设计并扩增PDCoV的M基因序列76～651 bp区域,与表达载体pET-32a构建重组质粒,转化大肠杆菌(Eschierichiia coil)Transetta(DE3)进行诱导表达,获得截短表达的M蛋白(约35 kD);Western blot实验证明其与猪PDCoV阳性血清有良好的反应原性.基于纯化的重组M截短蛋白构建间接ELISA方法,确定阴阳性判定临界值为0.271.建立的ELISA方法与猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)、猪繁殖与呼吸系统综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)、猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV-2)、猪伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)、猪口 蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)、猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)和猪传染性胃肠炎病毒(Swine transmissible gastroenteritis virus,TGEV)等阳性血清无交叉反应,批内和批间变异系数均小于10％;与基于PDCoV S1-CTD蛋白的间接ELISA方法的总符合率高达96％,表明该方法具备良好的特异性、敏感性、重复性及较高的符合率.用建立的ELISA方法检测2012～2018年四川部分地区收集的507份猪血清,结果显示总阳性率为49.11％,初步证明该病已在四川感染严重.本研究基于M截短蛋白构建的间接ELISA方法,为PDCoV疫病诊断和血清流行病学调查提供技术支持,对于PDCoV防控具有一定的意义.
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