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针对银染蛋白的胶内酶切质谱鉴定成功率较低的技术现状,对影响牛精子蛋白酶切鉴定的酶量、酶切时间、凝胶存储时间等影响因素进行了摸索,并优化了挖点、脱色、脱水、酶切消化和抽提肽段等操作细节,同时对质谱峰图中出现的污染问题进行了分析解决,提高了蛋白鉴定的成功率,为牛精子蛋白质的质谱鉴定奠定了技术基础。