【摘 要】
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探究质粒拷贝数以及目标蛋白S1表达量与发酵时间的关系,从而确定放大生产pLA-PEDV-S1/Lactobacillus casei的最佳发酵时间.通过发酵重组干酪乳杆菌,绘制重组干酪乳杆菌的生长
【机 构】
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黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院,黑龙江大庆,163319黑龙江八一农垦大学动物科技学院,黑龙江大庆,163319;黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院,黑龙江大庆163319;黑龙江八一农垦大学动物
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探究质粒拷贝数以及目标蛋白S1表达量与发酵时间的关系,从而确定放大生产pLA-PEDV-S1/Lactobacillus casei的最佳发酵时间.通过发酵重组干酪乳杆菌,绘制重组干酪乳杆菌的生长曲线,确定其生长的最佳时期.将pLA-PEDV-S1/L.casei分别接种至添加抗生素和不添加抗生素的MRS培养基中传代培养,进行稳定性实验.使用荧光定量PCR方法检测重组干酪乳杆菌中质粒的拷贝数,使用流式细胞术检测乳酸菌表达的目标蛋白.重组菌在7h达到生长顶点,传至120代时外源质粒并无丢失情况出现.质粒拷贝数在9h达到峰值29.34,表达目标蛋白的重组菌在7h达到峰值97.98％.结果显示在细菌生长的对数生长期末期,质粒拷贝数最高且S1表达量最多;在平台期随着发酵时间的增加,质粒拷贝数逐渐降低,S1表达量也相应减少.发酵的最佳时间为7～10h,质粒拷贝数与S1表达量之间存在着正相关性.
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