观察长链非编码RNA(lncRNA)结直肠肿瘤差异表达基因(CRNDE)对骨肉瘤细胞增殖、侵袭和凋亡能力的影响。
方法采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测6种骨肉瘤细胞株(Saos-2、HOS、MG63、143B、U-2OS)及正常骨细胞(hFOB1.19，购自中国北京医学科学院)中lncRNA CRNDE的表达，小干扰RNA(siRNA)技术构建MG63 lncRNA CRNDE低表达株。将lncRNA CRNDE小干扰RNA(lncRNA CRNDE-siRNA、无意义阴性序列(si-NC)分别转染MG63细胞，然后将转染后MG63分为3组，lncRNA CRNDE小干扰RNA(siRNA)组(lncRNA CRNDE-siRNA)、阴性对照组(Control-si)和空白对照组(Control-nc)；细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖；膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)/碘化丙锭(PI)检测细胞凋亡；Transwell法检测细胞迁移能力。细胞增殖结果以及流式细胞法凋亡结果采用重复测量资料的方差分析；细胞迁移检测结果的组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验。
结果与正常骨细胞(1.037±0.025)比较，5种骨肉瘤细胞株的表达量升高，分别为Saos-2(4.034±0.033)、HOS(3.896±0.045)、MG63(5.932±0.045)、143B(2.905±0.030)、U-2OS(5.632±0.015)，而骨肉瘤细胞中MG63 lncRNA CRNDE1表达水平最高(F＝215.568，P<0.01)；RT-qPCR显示，转染后MG63细胞内的lncRNA CRNDE表达明显降低，低表达细胞株构建成功(F＝32.535，P<0.01)；CCK-8实验结果显示，与阴性对照组(Control-si)和空白对照组(Control-nc)比较，lncRNA CRNDE-siRNA组MG63细胞增殖活力明显受到抑制，24、48、72 h的吸光度(A)值分别为(0.422±0.023)%、(0.402±0.019)%、(0.320±0.021)%(F＝48.632，P<0.01)、(0.659±0.032)%、(0.696±0.035)%、(0.409±0.032)%(F＝18.110，P<0.05)以及(1.006±0.078)%、(0.982±0.069)%、(0.713±0.030)%(F＝27.751，P<0.05)；Annexin V-FITC/PI检测结果显示，Control-si、Control-nc和lncRNA CRNDE-siRNA组MG63细胞的凋亡率显著上升，分别为(5.871±0.501)%、(4.231±0.261)%、(14.231±1.591)%(F＝119.480，P<0.01)；Transwell结果显示，Control-si、Control-nc和lncRNA CRNDE-siRNA组迁移细胞数分别为(85.0±3.2)、(88.0±8.0)、(54.0±1.9)个(F＝282.690，P<0.01)。
结论lncRNA CRNDE在骨肉瘤细胞中高表达，且与癌细胞增殖，凋亡和侵袭高度相关。