目的研究血清在构建角膜基质细胞体外三维培养模型中对细胞生长情况及胶原纤维生成的影响,为体外研究角膜基质细胞外基质(ECM)纤维化提供新的培养模型。设计实验研究。研究对象牛角膜基质细胞。方法分离原代牛角膜基质细胞,取第一代细胞作为种子细胞构建Pellet模型,实验分为对照组(DMEM/F12)和血清组(DMEM/F12+10%胎牛血清FBS)。Pellet模型培养3周后,肉眼观察细胞生长状态,同时进行HE染色及Calcein AM/PI染色测定细胞活性,并应用MASSON染色及透射电子显微镜(TEM)观察胶原纤维的形成、走向及排列情况。主要指标细胞生长状态、细胞活性、胶原纤维走向及排列情况。结果Pellet模型培养3周后,对照组未观察到角膜基质细胞抱团生长现象,且细胞易松散,难以进行后续实验;血清组Pellet模型中细胞明显成簇生长,呈粒状,结合牢固。Calcein AM/PI染色及HE染色可见血清组大多数细胞存活且密集生长,细胞结构完整。MASSON染色示血清组较多胶原纤维显色,并于TEM下观察到胶原纤维密集分布于细胞外且走向紊乱。结论含血清的培养环境能成功构建牛角膜基质细胞体外Pellet三维培养模型,且能生成含有胶原纤维的ECM。