【摘 要】
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以大分子合成操纵子序列MMS为靶标基因,研究建立了基于TaqMan探针的实时荧光定量PCR(TaqMan qRT-PCR)法以快速定量粉状婴幼儿食品(米粉及乳粉)中的克罗诺杆菌(Cronobacter sp
【机 构】
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厦门医学院基础医学部,福建厦门361023;机能与临床转化福建省高校重点实验室,福建厦门361023;厦门医学院呼吸病研究所,福建厦门361023
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以大分子合成操纵子序列MMS为靶标基因,研究建立了基于TaqMan探针的实时荧光定量PCR(TaqMan qRT-PCR)法以快速定量粉状婴幼儿食品(米粉及乳粉)中的克罗诺杆菌(Cronobacter spp.).结果表明,所建立的扩增体系特异性强(在供试的14种食源性细菌中,典型扩增曲线仅见于目标菌)、灵敏度高(对标准质粒、纯菌液、模拟染菌米粉及乳粉样液的检测限分别为58拷贝、9、7、7.4cfu/PCR反应体系).此外,质粒及菌浓度对数与qRT-PCR的Ct值间呈良好的线性相关性(拟合方程决定系数≥0.98).对人工染菌的婴幼儿米粉及乳粉盲样中克罗诺杆菌定量测试结果显示,快速定量法推算的菌落浓度与传统计数结果无统计学差异.综上,该研究所建立的基于qRT-PCR的目标菌定量法特异、灵敏、快速、稳健,可成为婴幼儿米粉及乳粉中克罗诺杆菌定量的高效筛选方案.
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