【摘 要】
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利用基因工程技术从赤子爱胜蚓（Eisenia fetida）c DNA中克隆得到一条全长为738 bp的蚓激酶编码基因Eflk（Gen Bank登录号KY452025）,其编码245个氨基酸,与粉正蚓（Lumbricus rubellus
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利用基因工程技术从赤子爱胜蚓（Eisenia fetida）c DNA中克隆得到一条全长为738 bp的蚓激酶编码基因Eflk（Gen Bank登录号KY452025）,其编码245个氨基酸,与粉正蚓（Lumbricus rubellus）F-III-2的核苷酸和氨基酸序列同源性最高分别为96.21%和97.14%。利用生物信息学方法预测分析蚓激酶EFLK蛋白分子主要由β折叠结构组成,理论等电点（p I）为4.97,其活性中心为Arg15-Phe19-Pro20-Glu66-Asn113,位于loop结构所形成的隧道结构中。将该基因与p PIC9k载体相连接后电击导入毕赤酵母GS115中得到重组表达菌株GS115-p PIC9K-Eflk,重组菌株经甲醇诱导发酵72 h,发酵液中蚓激酶活力达到224.8 u/ml。纯化后重组酶蛋白的比活力为4 545.84 u/mg,相对分子质量为2.7×104。酶学性质研究结果表明该酶的最适p H值为8.0,在p H 5.09.0范围内催化活力较高;在低于40℃条件下该酶的催化活性较稳定。
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