【摘 要】
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目的 构建β-连环蛋白特异的RNA干扰(RNA interference,RNAi)慢病毒表达载体,初步探讨Wnt/β-连环蛋白信号通路对小鼠胰岛β细胞增殖的影响.方法 利用体外同源重组技术构建短
【机 构】
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福建省立医院内分泌科福建医科大学省立临床医学院内分泌科
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目的 构建β-连环蛋白特异的RNA干扰(RNA interference,RNAi)慢病毒表达载体,初步探讨Wnt/β-连环蛋白信号通路对小鼠胰岛β细胞增殖的影响.方法 利用体外同源重组技术构建短发夹RNA(shRNA)慢病毒表达载体,与辅助包装质粒一起在293 T淋巴细胞中包装并扩增病毒,逐孔稀释法测定病毒滴度;RNAi慢病毒感染小鼠胰岛β细胞,实时PCR以及Western blot法检测其对β-连环蛋白表达的抑制效应;利用构建的RNAi慢病毒抑制β-连环蛋白表达,四甲基偶氮唑盐法检测小鼠胰岛β细胞增殖活性.组间比较采用方差分析(ANOVA).结果 成功构建了β-连环蛋白特异的RNAi慢病毒表达载体,获得的慢病毒滴度在5.0×10~8TU/ml左右;RNAi慢病毒在3 d后就能有效感染小鼠胰岛β细胞,5 d后使细胞内β-连环蛋白基因mRNA和相应蛋白的表达受到明显抑制;慢病毒感染小鼠胰岛β细胞后,细胞增殖率明显减少.结论 构建的目的RNAi慢病毒表达载体能有效抑制β-连环蛋白基因的表达;Wnt/β-连环蛋白信号通路在小鼠胰岛β细胞增殖中有重要影响.
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