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根据鸭甲型肝炎病毒（Duck hepatitis A virus,DHAV）的基因序列,设计了2对特异性引物,分别建立检测鸭甲型肝炎病毒血清1型（DHAV-1）和鸭甲型肝炎病毒血清3型（DHAV-3）的RT-PCR方法。通过对PCR扩增条件优化建立了鉴别血清1型和血清3型DHAV的二重RT-PCR检测方法,DHAV-1和DHAV-3目的片段大小分别为751bp和448bp,而且对其他禽病病原的PCR扩增结果均为阴性。敏感性试验表明该检测方法最低检测量为10 pg的DHAV-1和8 pg的DHAV-3模板。