论文部分内容阅读
目的 探讨内毒素休克损伤的肺动脉内皮细胞对肺动脉平滑肌细胞增殖的影响及骨形态发生蛋白-2(BMP-2)的干扰作用.方法 (1)内皮细胞条件培养液(EC-CM)制作:EC-CM1:用不含血清的DMEM培养基孵育融合成单层的肺动脉内皮细胞(PAEC)24 h,收集上清培养液制成;EC-CM2:以终浓度为1 μg/ml的内毒素孵育融合成单层的PAEC 1 h后用不含血清的DMEM培养基孵育24 h收集上清培养液制成.(2)分组及指标观测:将贴块法培养的肺动脉平滑肌细胞(PASMC)分成5组,分别用EC-CM1、EC-CM2、EC-CM2+BMP-2 1 ng/ml、EC-CM2+BMP-2 10 ng/ml和EC-CM2+BMP-2 100 ng/ml孵育PASMC.使用BrdU法测定PASMC增殖率;流式细胞仪分析PASMC细胞周期的变化;3H-TdR掺入实验检测DNA合成情况;RT-PCR检测细胞周期素D1(cyclinD1)mRNA的表达量;免疫印迹检测pSmad蛋白量及细胞周期素(CyclinD1)蛋白表达.结果 与Ⅰ组比较,Ⅱ组引起PASMC增殖率升高,S期细胞百分比增加,DNA合成增加(P＜0.01),同时,cyclinD1mRNA及蛋白表达增加(P＜0.01),pSmad蛋白量两组差异无统计学意义(P＞0.05);与Ⅱ组比较,Ⅲ组中上述各指标无明显变化(P＞0.05),而Ⅳ组、Ⅴ组中PASMC增殖率显著下降,S期细胞百分比下降,DNA合成减少(P＜0.01),同时cyclinD1mRNA及蛋白表达显著下降(P＜0.01),pSmad蛋白量显著增加(P＜0.01).结论 EC-CM2诱导PASMC cyclinD1的高表达,促进PASMC增殖;BMP-2可以通过激活Smad1信号转导途径抑制EC-CM2培养的PASMC表达cyclinD1,进而抑制EC-CM2刺激引起的PASMC增殖,BMP2作用在1～100 ng/ml浓度范围内呈剂量依赖性.