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【摘 要】制作和保存马匹冷冻精液,可以充分发挥优秀种公马的利用率,而且不受时间和地域的限制,同时也建立了优秀种公马的精子基因库,对优良马匹的保种具有非常重要的意义,在生产实践中可同时为大量授配母马进行输精。
【关键词】汗血马;阿拉伯马;种公马;冻精制作;精子活力
马匹的精液冷冻保存技术,从20世纪50年代开始研究,目前用于生产效果不佳,因此在生产中没有得到普及应用。山丹马场是全国最大的马场,为了适应马匹市场的需求,山丹马场在1997年至2000年连续四年与中国种畜进出口公司阿拉伯马场合作,在北京制作阿拉伯种公马的冻精,对山丹马进行改良,由于当时的冻精制作技术和解冻技术存在一定问题,解冻后精子活力为0.2—0.3,冻配情期受胎率只有36.8%,从而使山丹马场的冻配改良工作停止。2010年山丹马场已组成由阿丹、英丹、顿丹杂一代繁殖母马群180匹、山丹母马群150匹。为进一步加大改良力度,在中牧公司的支持下,与华牧公司合作,在北京制作汗血马和阿拉伯马的冻精。这次制作冻精时,吸取以前的经验,改变冷冻液和解冻液配方,制作汗血马冻精颗粒320粒,制作阿拉伯马冻精颗粒800粒,解冻后精子活力分别为0.6和0.5。现将冻精制作、解冻过程及其应用综述如下:
1冻精的制作
1.1稀释液的配制
100ml蒸馏水,11g蔗糖(分析纯),充分溶解后进行高压灭菌消毒。
1.2 冷冻液的配制
100ml蒸馏水,11g蔗糖(分析纯),16ml鲜卵黄(鸡蛋),8ml甘油,3.4g脱脂无糖奶粉,10万单位青霉素,10万单位链霉素,将以上材料混合后搅拌均匀。
1.3 公马精液的提取
采取台马假阴道采精法,将采集到的公马精液用消毒过的纱布(4层)过滤到消毒过的烧杯中。
1.4 精液的稀释
过滤后的精液与稀释液在同等温度下进行1:1稀释。
1.5 精液的分离
将稀释后的精液分装在离心管内进行离心,以2500r/min离心15min,离心后用吸管吸去上层精清,留用下层精子粥。
1.6 精子粥的二次稀释
将离心后留用的精子粥与冷冻液按1:1进行稀释并用吸管混匀。
1.7 平衡
将两次稀释后的精液用吸管抽吸集中于1个离心管中,用等温的棉花或6—8层纱布包好,放入7℃的冰箱內平衡2h。
1.8 滴制颗粒冻精
将液氮倒入广口液氮罐内,液面距灌口1cm左右,放入20目的铜纱网扇于液氮内,等待冷却后,将网刪固定距液面1厘米处,将平衡后的精液用吸管以0.3ml左右为1粒,滴于网刪上,等待颗粒完全凝固后将网刪和颗粒一起沉入液氮中。
1.9 镜检与保存
将冷冻好的颗粒冻精取出1粒进行解冻后镜检,精子活力达到0.3以上进行装袋,做好标签注明公马品种、马名或马号、颗粒数、生产日期,然后将袋子置于液氮罐中保存待用。
2 冻精的解冻
2.1 解冻液的配制
100ml蒸馏水,将6g蔗糖(分析纯)、3.4g脱脂无糖奶粉充分溶解后进行高压灭菌消毒。
2.2 解冻
将配制好的解冻液冷却到42℃左右后,用吸管吸取15ml置于50ml烧杯中,再将烧杯放于45度恒温水浴锅内的烧杯架上,2min后,烧杯内解冻液温度也恒定为45℃时,一次取出3个颗粒冻精,在烧杯口停留10~15s后,把3个颗粒冻精一次性放入烧杯中的解冻液内,用手指捏住烧杯顺时针摇晃,待颗粒完全溶解后,将烧杯放于工作台上3~5min后进行镜检待用。
3 冻精的应用
3.1汗血马冻精的应用
2010年5月山丹马场从北京华牧公司处取回汗血马冻精50颗粒,对山丹马和杂一代马进行冻配,配排7匹,受胎6匹,情期受胎率为85.8%,与鲜精配种的情期受胎率基本等同。
3.2阿拉伯马冻精的应用
2010年5月山丹马场从北京华牧公司处取回阿拉伯马冻精800颗粒,对山丹马进行杂交改良,对杂一代马进行三元杂交和级进杂交,山丹马冻配情期受胎率为73%,杂一代马冻配情期受胎率为67.5%。
4 体会
2013年在制作冻精时,吸取以往的经验,进行了一些调整:一是改变了冷冻液和解冻液配方。二是在制作冷冻液和解冻液配方所用的材料必须是同一品牌,冷冻液和解冻液配方所用的材料不同,对精虫产生不同的渗透压,严重影响解冻后精液的品质、活力和存活时间,是造成冻配受胎率低下的主要原因。三是把握马群配种的最佳时间,在山丹马场的最佳配种时间是6~7月份,过早马匹膘情差,过迟错过马匹最佳发情时机,也是造成冻配受胎率低下的因素之一。四是掌握熟练的马匹发情鉴定技术,正确判断卵泡的发育时期,做到适时输精。如果输精过早势必造成精液的浪费,同时也增加了输精次数,容易引起马匹的子宫炎症;如果输精过晚,错过马匹的发情时机,同样也会造成受胎率低下。
【关键词】汗血马;阿拉伯马;种公马;冻精制作;精子活力
马匹的精液冷冻保存技术,从20世纪50年代开始研究,目前用于生产效果不佳,因此在生产中没有得到普及应用。山丹马场是全国最大的马场,为了适应马匹市场的需求,山丹马场在1997年至2000年连续四年与中国种畜进出口公司阿拉伯马场合作,在北京制作阿拉伯种公马的冻精,对山丹马进行改良,由于当时的冻精制作技术和解冻技术存在一定问题,解冻后精子活力为0.2—0.3,冻配情期受胎率只有36.8%,从而使山丹马场的冻配改良工作停止。2010年山丹马场已组成由阿丹、英丹、顿丹杂一代繁殖母马群180匹、山丹母马群150匹。为进一步加大改良力度,在中牧公司的支持下,与华牧公司合作,在北京制作汗血马和阿拉伯马的冻精。这次制作冻精时,吸取以前的经验,改变冷冻液和解冻液配方,制作汗血马冻精颗粒320粒,制作阿拉伯马冻精颗粒800粒,解冻后精子活力分别为0.6和0.5。现将冻精制作、解冻过程及其应用综述如下:
1冻精的制作
1.1稀释液的配制
100ml蒸馏水,11g蔗糖(分析纯),充分溶解后进行高压灭菌消毒。
1.2 冷冻液的配制
100ml蒸馏水,11g蔗糖(分析纯),16ml鲜卵黄(鸡蛋),8ml甘油,3.4g脱脂无糖奶粉,10万单位青霉素,10万单位链霉素,将以上材料混合后搅拌均匀。
1.3 公马精液的提取
采取台马假阴道采精法,将采集到的公马精液用消毒过的纱布(4层)过滤到消毒过的烧杯中。
1.4 精液的稀释
过滤后的精液与稀释液在同等温度下进行1:1稀释。
1.5 精液的分离
将稀释后的精液分装在离心管内进行离心,以2500r/min离心15min,离心后用吸管吸去上层精清,留用下层精子粥。
1.6 精子粥的二次稀释
将离心后留用的精子粥与冷冻液按1:1进行稀释并用吸管混匀。
1.7 平衡
将两次稀释后的精液用吸管抽吸集中于1个离心管中,用等温的棉花或6—8层纱布包好,放入7℃的冰箱內平衡2h。
1.8 滴制颗粒冻精
将液氮倒入广口液氮罐内,液面距灌口1cm左右,放入20目的铜纱网扇于液氮内,等待冷却后,将网刪固定距液面1厘米处,将平衡后的精液用吸管以0.3ml左右为1粒,滴于网刪上,等待颗粒完全凝固后将网刪和颗粒一起沉入液氮中。
1.9 镜检与保存
将冷冻好的颗粒冻精取出1粒进行解冻后镜检,精子活力达到0.3以上进行装袋,做好标签注明公马品种、马名或马号、颗粒数、生产日期,然后将袋子置于液氮罐中保存待用。
2 冻精的解冻
2.1 解冻液的配制
100ml蒸馏水,将6g蔗糖(分析纯)、3.4g脱脂无糖奶粉充分溶解后进行高压灭菌消毒。
2.2 解冻
将配制好的解冻液冷却到42℃左右后,用吸管吸取15ml置于50ml烧杯中,再将烧杯放于45度恒温水浴锅内的烧杯架上,2min后,烧杯内解冻液温度也恒定为45℃时,一次取出3个颗粒冻精,在烧杯口停留10~15s后,把3个颗粒冻精一次性放入烧杯中的解冻液内,用手指捏住烧杯顺时针摇晃,待颗粒完全溶解后,将烧杯放于工作台上3~5min后进行镜检待用。
3 冻精的应用
3.1汗血马冻精的应用
2010年5月山丹马场从北京华牧公司处取回汗血马冻精50颗粒,对山丹马和杂一代马进行冻配,配排7匹,受胎6匹,情期受胎率为85.8%,与鲜精配种的情期受胎率基本等同。
3.2阿拉伯马冻精的应用
2010年5月山丹马场从北京华牧公司处取回阿拉伯马冻精800颗粒,对山丹马进行杂交改良,对杂一代马进行三元杂交和级进杂交,山丹马冻配情期受胎率为73%,杂一代马冻配情期受胎率为67.5%。
4 体会
2013年在制作冻精时,吸取以往的经验,进行了一些调整:一是改变了冷冻液和解冻液配方。二是在制作冷冻液和解冻液配方所用的材料必须是同一品牌,冷冻液和解冻液配方所用的材料不同,对精虫产生不同的渗透压,严重影响解冻后精液的品质、活力和存活时间,是造成冻配受胎率低下的主要原因。三是把握马群配种的最佳时间,在山丹马场的最佳配种时间是6~7月份,过早马匹膘情差,过迟错过马匹最佳发情时机,也是造成冻配受胎率低下的因素之一。四是掌握熟练的马匹发情鉴定技术,正确判断卵泡的发育时期,做到适时输精。如果输精过早势必造成精液的浪费,同时也增加了输精次数,容易引起马匹的子宫炎症;如果输精过晚,错过马匹的发情时机,同样也会造成受胎率低下。