【摘 要】
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目的 探索免疫球蛋白重链可变区(IgHV)是否存在T细胞识别的表位.方法 PCR扩增108例急性淋巴细胞白血病(ALL)的7个IgHV家族的重排基因,PCR产物直接测序并翻译成氨基酸.利用互联网生物信息资源分析B-ALL IgHV基因的重排类型和基因变异,利用SYFPEITHI 和BIMAS软件预测IgHV基因编码蛋白质的T细胞表位.合成代表性九肽IgHV1家族的QLVQSGAEV,进行T2结合分
【机 构】
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解放军总医院小儿内科,100034,北京大学第一医院血液科,首都医科大学附属北京儿童医院
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目的 探索免疫球蛋白重链可变区(IgHV)是否存在T细胞识别的表位.方法 PCR扩增108例急性淋巴细胞白血病(ALL)的7个IgHV家族的重排基因,PCR产物直接测序并翻译成氨基酸.利用互联网生物信息资源分析B-ALL IgHV基因的重排类型和基因变异,利用SYFPEITHI 和BIMAS软件预测IgHV基因编码蛋白质的T细胞表位.合成代表性九肽IgHV1家族的QLVQSGAEV,进行T2结合分析、合成九肽诱导的T细胞扩增、扩增细胞的HLA-A*0201/QLVQSGAEV四聚体检测等实验,确定合成九肽的免疫原性.结果 66%的B-ALL检测到IgHV基因重排克隆.在40份测序得到的B-ALL IgHV序列中,选出26份进行HLA-A*0201分子结合九肽的预测,发现7个IgHV家族共有12条抗原九肽.除1条位于第3互补决定区(CDR3)外, 10条(83%)位于框架区(FR),并与相应胚系VH家族的代表序列相同;为同一IgHV家族的白血病细胞所共有.合成的IgHV1抗原九肽可将T2细胞表面HLA-A*0201分子的表达提高1.63倍. HLA-A*0201正常供者的外周血淋巴细胞接受该九肽负荷的自身PBMC的1轮刺激,CD8+四聚体+细胞达1.64%,继续接受该九肽负荷的T2细胞的2轮刺激,CD8+四聚体+细胞增至82.57%.结论 B淋巴细胞的免疫球蛋白重链框架区有CTL识别的IgHV家族特异的抗原九肽,正常人外周血T细胞库存在这些抗原九肽特异的CTL,这些抗原九肽可诱导特异性CTL的增殖。
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