花生AhGPAT9与AhLPAAT 4基因的原核表达及WesternBlot分析

来源 :花生学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户：dafsgdfgd

【摘要】

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酰基转移酶基因家族是甘油三酯合成的关键基因。本研究以前期克隆的AhGPAT9与AhLPAAT4基因部分序列设计引物,构建原核表达载体,转化进大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达,利用SDS-P

【作者】

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杨珍郝翠翠李昊远焦坤王通王冕陈娜陈明娜潘丽娟

【机构】

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山东省花生研究所,青岛科技大学海洋科学与生物工程学院,哈尔滨工业大学威海海洋科学与技术学院,哈尔滨工业大学市政环境工程学院

【出处】

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花生学报

【发表日期】

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2017年3期

【关键词】

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花生 AhGPAT9 AhLPAAT4 原核表达多克隆抗体蛋白质免疫印记法 peanut AhGPAT 9 AhLPAAT 4 prokaryotic

【基金项目】

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2014年国家“万人计划”青年拔尖人才,国家花生产业技术体系项目（CARS-14）,山东省自然科学基金项目（ZR2014YL011,ZR2014YL012）,国家自然科学基金项目（31000728,31200211）,山东省农业科学院青年科研基金项目（2016YQN14）,青岛市应用基础研究项目（17-1-1-51-jch）,青岛市民生计划项目（14-2-3-34-nsh）,山东农业科学院农业科技

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酰基转移酶基因家族是甘油三酯合成的关键基因。本研究以前期克隆的AhGPAT9与AhLPAAT4基因部分序列设计引物,构建原核表达载体,转化进大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达,利用SDS-PAGE检测表明,重组蛋白在37℃,5h诱导条件下获得高效表达。重组蛋白经纯化和富集,对新西兰兔进行4次免疫,纯化获得的多克隆抗血清,通过间接ELISA检测,表明获得了效价比较高的多克隆抗体。通过对重组蛋白纯化后样品进行Western Blot分析,结果显示在纯化样品相应位置有明显信号,表明所制备的抗体具有很高灵敏度和

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