人RhoB基因真核表达载体的构建和表达分析

来源 :生物技术通报 | 被引量 : 0次 | 上传用户：sinhuy258

【摘要】

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旨在构建带Flag标签的人RhoB基因真核表达载体并检测其表达。提取人胚肾细胞HEK-293T总RNA并反转录获得cDNA;设计引物并利用PCR技术扩增RhoB基因的ORF序列;将所扩增序列插入

【作者】

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王梅林牛精铃金若其徐莹莹蔡晶晶陈群力

【机构】

：

河南科技大学医学院

【出处】

：

生物技术通报

【发表日期】

：

2019年10期

【关键词】

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RhoB 真核表达免疫荧光

【基金项目】

：

国家自然科学基金项目(31500631)

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旨在构建带Flag标签的人RhoB基因真核表达载体并检测其表达。提取人胚肾细胞HEK-293T总RNA并反转录获得cDNA;设计引物并利用PCR技术扩增RhoB基因的ORF序列;将所扩增序列插入到带Flag标签的pCMV5真核表达载体,插入位点位于限制性内切酶SalⅠ和XbaⅠ之间,得到真核表达载体Flag-RhoB。酶切并测序验证该质粒的准确性。将成功构建的Flag-RhoB质粒转染乳腺癌MCF7细胞、宫颈癌HeLa细胞以及结直肠癌HCT116细胞,Western Blotting检测RhoB蛋白的表达

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