MAGE-3原核表达载体的构建和表达

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通过RT-PCR扩增957bp的MAGE-3全长编码序列,将该片段克隆至pGEX-4T-2原核表达载体,转化大肠杆菌BL-21,经IPTG诱导表达,并经12%SDS-PAGE凝胶电泳,考马斯亮蓝染色及Western blot鉴定,证明了目的基因的有效表达,目的蛋白高达细菌总蛋白的32%.表达产物经Glutathione Sepharose 4B 纯化后,每100mL菌液最终可获得3mg的目的蛋白,蛋白纯度在90%以上.纯化的GST-MAGE-3蛋白在体外冲击树突状细胞,能诱导特异性CTL杀伤肿瘤细胞活性.
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