【摘 要】
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从烟草花叶病毒 (TMV)中提取总RNA ,通过反转录 PCR (RT PCR)扩增得到其运动蛋白 (MP)的基因 ,将扩增产物克隆到pMD 18T载体上。DNA序列分析表明 ,所得到的运动蛋白的基因全
【机 构】
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南京医科大学分子生物学系,中国科学院微生物研究所分子病毒室,南京医科大学分子生物学系
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从烟草花叶病毒 (TMV)中提取总RNA ,通过反转录 PCR (RT PCR)扩增得到其运动蛋白 (MP)的基因 ,将扩增产物克隆到pMD 18T载体上。DNA序列分析表明 ,所得到的运动蛋白的基因全长为 80 7bp (GenBank接受号AY30 0 16 1) ,与已发表TMV序列 (GenBank登陆号为NC- 0 0 136 7)和同属的番茄花叶病毒 (ToMV ,GenBank登陆号为NC- 0 0 2 6 92相比核苷酸的同源性分别为 98 0 %和 80 9% ,氨基酸的同源性分别为 99 1%和 80 0 %。将目的片段亚克隆到表达载体pET 30a上 ,并在大肠杆菌JM10 9中诱导表达 ,诱导 9h后 ,融合蛋白表达量最大。诱导后的工程菌超声后经SDS PAGE检测 ,融合蛋白以可溶形式存在。
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