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通过实验室应用试验证明,革兰氏染色三步法虽操作简单、染色快、成功率高、效果好,但要严格控制相关环节,即革兰氏阳性菌菌龄16-20h,革兰氏阴性菌菌龄22-24h;取菌量要少于1/3环,涂菌要稀薄、分散均匀;在结晶紫和碘液染色时间各1min条件下,第三步以0.4%碱性品红乙醇液处理时间60-90 s,或以0.3%蕃红乙醇液处理时间90-120 s,效果较佳。