【摘 要】
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目的纯化柯萨奇病毒（CV）-A6、CV-A16 cDNA，在此基础上将CV-A6-VP（结构蛋白）替换CV-A16-VP构建重组病毒pBM16A-Re（CV-A16-CV-A6-VP），并研究其感染性，为CV-A6、CV-A16及重组疫苗的研发提供依据。方法提取CV-A6、CV-A16基因组RNA，经RT-PCR得到基因组全长cDNA，PCR后纯化插入至pBM16A-TOPO载体，利用T7聚合酶系
【机 构】
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浙江省医学科学院病毒病研究所，浙江省医学生物工程疫苗研发重点实验室，杭州 310053,浙江省医学科学院病毒病研究所，浙江省医学生物工程疫苗研发重点实验室，杭州 310053,浙江省医学科学院病毒病研
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目的纯化柯萨奇病毒（CV）-A6、CV-A16 cDNA，在此基础上将CV-A6-VP（结构蛋白）替换CV-A16-VP构建重组病毒pBM16A-Re（CV-A16-CV-A6-VP），并研究其感染性，为CV-A6、CV-A16及重组疫苗的研发提供依据。
方法提取CV-A6、CV-A16基因组RNA，经RT-PCR得到基因组全长cDNA，PCR后纯化插入至pBM16A-TOPO载体，利用T7聚合酶系统将线性基因组cDNA体外转录得到病毒基因组RNA，纯化后转染Vero细胞，获得重组病毒Re，并对Re进行显微镜观察、基因测序、免疫荧光等方法检测鉴定其感染性。
结果构建的CV-A6、CV-A16、Re经电泳鉴定可见约7 500 bp的条带。得到的pBM16A-CV-A6、pBM16A-CV-A16、pBM16A-Re经限制性内切酶双酶切鉴定，可见约7 500 bp的目的条带和约1 800 bp的载体条带。构建的克隆经全基因测序验证与理论序列完全一致。细胞形态学鉴定显示，CV-A16组可见典型肠道病毒所致的细胞病变，CV-A6及Re组则没有明显病变；RT-PCR鉴定也得出相同结果。
结论成功构建重组CV-A6、CV-A16和重组病毒Re，重组CV-A16与母本野生型病毒增殖特性基本一致，重组病毒pBM16A-Re丧失细胞感染性。
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