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摘要：目的 研究影响刺蓝抗疲劳口服液提取工艺因素，确定最佳条件。方法 采用L9（34）进行正交设计试验，对刺蓝抗疲劳口服液提取工艺进行优选，以紫丁香苷、人参皂苷Rb1提取量及浸膏提取率为考察指标，考察加水量、提取时间、药材粒径对提取工艺的影响。结果 最佳工艺条件为饮片加水煎煮二次，第一次加10倍水，煎煮2 h，第二次加8倍水，煎煮1.5 h。结论 该工艺稳定可靠，简便易行，可用于刺蓝抗疲劳口服液的工业化生产。
关键词：刺蓝抗疲劳口服液；正交设计；提取工艺
刺蓝抗疲劳口服液是由刺五加、绞股蓝枸杞子等制成的中药六类新药，功能调补气血，强精神，益气力，用于术后疲劳综合征。证属气血亏虚者。为了提高药材中有效物质的利用率，我们根据处方有效成分的性质，采用正交试验对刺蓝抗疲劳口服液的提取工艺进行了研究。
1 仪器与试液
LC-10A高效液相色谱仪（日本岛津），N2000色谱工作站（浙江大学智能信息工程研究所），PBQ-Ⅱ型薄层自动铺板器（重庆南岸新力实验电器厂），硅胶G（青岛海洋化工厂），AE-240型电子分析天平（中国梅特勒-托利多仪器厂）；刺五加、绞股蓝等药材购自长沙九旺医药有限公司，紫丁香苷、人参皂苷Rb1 均由中国药品生物制品检定所提供，所用试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 因素水平表
2.2.1 浸膏得率的测定 用L9（34）正交表安排试验，称取1/10处方量药材，按设定方案进行提取，滤过，滤液合并，浓缩，定容至100 ml。精密吸取10 ml，置已干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，于105℃干燥3 h，置干燥器中冷却0.5 h，迅速称重，按下式计算浸膏得率。
浸膏得率（%）=W×v10×87×100%
2.2.2 紫丁香苷含量测定[1]
2.2.2.1 色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水（13∶87）为流动相；检测波长为265nm；理论板数按紫丁香苷峰计算不得低于2000。
对照品溶液的制备精密称取紫丁香苷对照品适量，加甲醇制成每1 ml含0.1 mg的溶液，即得。
2.2.2.2 供试品溶液的制备 取（2.1）项下已定容的9份余液，分别精密量取2 ml，置10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用0.45 μm的微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。共制得9个样品。
2.2.2.3 测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液10 μl，注入液相色谱仪，测定，计算，即得。
2.2.3 人参皂苷Rb1含量的测定
2.2.3.1 色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.5%磷酸（20∶80）为流动相；检测波长为203nm；理论板数按人参皂苷Rb1峰计算不得低于2000。
2.2.3.2 對照品溶液的制备 精密称取人参皂苷Rb1对照品适量，加甲醇制成每1 ml含0.1 mg的溶液，即得。
2.2.3.3 供试品溶液的制备 取紫丁香苷含量测定项下的供试品作为供试品。
2.2.3.4 测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液10 μl，注入液相色谱仪，测定，计算，即得。
以浸膏得率为考察指标，表中极差R值大小显示，各因素作用主次为B>A>C；B1>B2>B3，A2>A3>A1，C2>C1>C3；方差分析结果表明：B因素有非常显著性意义（P<0.01），A因素有显著性意义（P<0.05），以B1A2C2组合为佳。
以紫丁香苷提取量为考察指标，表中极差R值大小显示，各因素作用主次为A>B>C，且A1>A2>A3，B1>B2>B3，C2>C1>C3；方差分析结果表明：A因素有非常显著性意义（P<0.01），B因素有显著性意义（P<0.05），以A1B1C2组合为佳。
以人参皂苷Rb1提取量为考察指标，表中极差R值大小显示，各因素作用主次为A>B>C，且A1>A2>A3，B1>B2>B3，C3>C1>C2；方差分析结果表明：A、B因素有显著性意义（P<0.05），以A1B1C1组合为佳。
综合以上实验结果表明，加水量、提取时间对提取效果具有显著性影响，药材粒径对提取效果无显著性影响，本产品中紫丁香苷提取量及人参皂苷提取量作为重要因素考虑，因此以A1B1C1为最佳组合。
2.3 验证试验
平行称取同一批1/10处方量药材3份，按A1B1C1进行试验.
根据上述验证实验结果，故确定最佳工艺条件为A1B1C1，即取饮片加水煎煮2次，第一次加10倍量水，煎煮2 h，第二次加8倍量水，煎煮1.5 h。
3 讨论
3.1 刺五加具有益气健脾，补气安神的功能，为方中君药，药理和临床研究结果表明：刺五加中所含的总苷是抗疲劳、扶正固本的有效成分[2]；绞股蓝所含的绞股蓝总苷是抗疲劳、防治多脏器损伤的有效成分[3]；上述成分水溶性好，因此选择水作为本制剂的提取溶剂。
3.2 本试验以刺五加中含的紫丁香苷，绞股蓝中含的人参皂苷Rb1及浸膏提取率作为评价指标，通过正交试验法对刺蓝抗疲劳口服液的提取工艺条件进行了优化，并按最佳工艺进行了验证，结果表明该工艺重复性好，有效组分提取效率高，且经济可行。本研究为刺蓝抗疲劳口服液的生产工艺提供了合理依据。
参考文献：
[1] 中国药典委员咐.中华人民共和国药典.一部.北京.中国医药科技出版社，2010：192.
[2] 郭爱民.刺五加的现代研究进展.中国现代药物应用，2009，3（10）：194.
[3] 孙万森，齐典.绞股蓝总苷防治多脏器损伤的药理研究进展.中药材，2007，30（2）：241.
关键词：刺蓝抗疲劳口服液；正交设计；提取工艺
刺蓝抗疲劳口服液是由刺五加、绞股蓝枸杞子等制成的中药六类新药，功能调补气血，强精神，益气力，用于术后疲劳综合征。证属气血亏虚者。为了提高药材中有效物质的利用率，我们根据处方有效成分的性质，采用正交试验对刺蓝抗疲劳口服液的提取工艺进行了研究。
1 仪器与试液
LC-10A高效液相色谱仪（日本岛津），N2000色谱工作站（浙江大学智能信息工程研究所），PBQ-Ⅱ型薄层自动铺板器（重庆南岸新力实验电器厂），硅胶G（青岛海洋化工厂），AE-240型电子分析天平（中国梅特勒-托利多仪器厂）；刺五加、绞股蓝等药材购自长沙九旺医药有限公司，紫丁香苷、人参皂苷Rb1 均由中国药品生物制品检定所提供，所用试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 因素水平表
2.2.1 浸膏得率的测定 用L9（34）正交表安排试验，称取1/10处方量药材，按设定方案进行提取，滤过，滤液合并，浓缩，定容至100 ml。精密吸取10 ml，置已干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，于105℃干燥3 h，置干燥器中冷却0.5 h，迅速称重，按下式计算浸膏得率。
浸膏得率（%）=W×v10×87×100%
2.2.2 紫丁香苷含量测定[1]
2.2.2.1 色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水（13∶87）为流动相；检测波长为265nm；理论板数按紫丁香苷峰计算不得低于2000。
对照品溶液的制备精密称取紫丁香苷对照品适量，加甲醇制成每1 ml含0.1 mg的溶液，即得。
2.2.2.2 供试品溶液的制备 取（2.1）项下已定容的9份余液，分别精密量取2 ml，置10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用0.45 μm的微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。共制得9个样品。
2.2.2.3 测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液10 μl，注入液相色谱仪，测定，计算，即得。
2.2.3 人参皂苷Rb1含量的测定
2.2.3.1 色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.5%磷酸（20∶80）为流动相；检测波长为203nm；理论板数按人参皂苷Rb1峰计算不得低于2000。
2.2.3.2 對照品溶液的制备 精密称取人参皂苷Rb1对照品适量，加甲醇制成每1 ml含0.1 mg的溶液，即得。
2.2.3.3 供试品溶液的制备 取紫丁香苷含量测定项下的供试品作为供试品。
2.2.3.4 测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液10 μl，注入液相色谱仪，测定，计算，即得。
以浸膏得率为考察指标，表中极差R值大小显示，各因素作用主次为B>A>C；B1>B2>B3，A2>A3>A1，C2>C1>C3；方差分析结果表明：B因素有非常显著性意义（P<0.01），A因素有显著性意义（P<0.05），以B1A2C2组合为佳。
以紫丁香苷提取量为考察指标，表中极差R值大小显示，各因素作用主次为A>B>C，且A1>A2>A3，B1>B2>B3，C2>C1>C3；方差分析结果表明：A因素有非常显著性意义（P<0.01），B因素有显著性意义（P<0.05），以A1B1C2组合为佳。
以人参皂苷Rb1提取量为考察指标，表中极差R值大小显示，各因素作用主次为A>B>C，且A1>A2>A3，B1>B2>B3，C3>C1>C2；方差分析结果表明：A、B因素有显著性意义（P<0.05），以A1B1C1组合为佳。
综合以上实验结果表明，加水量、提取时间对提取效果具有显著性影响，药材粒径对提取效果无显著性影响，本产品中紫丁香苷提取量及人参皂苷提取量作为重要因素考虑，因此以A1B1C1为最佳组合。
2.3 验证试验
平行称取同一批1/10处方量药材3份，按A1B1C1进行试验.
根据上述验证实验结果，故确定最佳工艺条件为A1B1C1，即取饮片加水煎煮2次，第一次加10倍量水，煎煮2 h，第二次加8倍量水，煎煮1.5 h。
3 讨论
3.1 刺五加具有益气健脾，补气安神的功能，为方中君药，药理和临床研究结果表明：刺五加中所含的总苷是抗疲劳、扶正固本的有效成分[2]；绞股蓝所含的绞股蓝总苷是抗疲劳、防治多脏器损伤的有效成分[3]；上述成分水溶性好，因此选择水作为本制剂的提取溶剂。
3.2 本试验以刺五加中含的紫丁香苷，绞股蓝中含的人参皂苷Rb1及浸膏提取率作为评价指标，通过正交试验法对刺蓝抗疲劳口服液的提取工艺条件进行了优化，并按最佳工艺进行了验证，结果表明该工艺重复性好，有效组分提取效率高，且经济可行。本研究为刺蓝抗疲劳口服液的生产工艺提供了合理依据。
参考文献：
[1] 中国药典委员咐.中华人民共和国药典.一部.北京.中国医药科技出版社，2010：192.
[2] 郭爱民.刺五加的现代研究进展.中国现代药物应用，2009，3（10）：194.
[3] 孙万森，齐典.绞股蓝总苷防治多脏器损伤的药理研究进展.中药材，2007，30（2）：241.