【摘 要】
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目的 建立和评价鉴别新甲型H1N1、甲型和乙型流行性感冒(简称流感)病毒的单管多重荧光定量RT-PCR方法.方法 2010年10月至2011年4月,采集流感样患者咽拭子样本213份.分别选用
【机 构】
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浙江中医药大学附属第一医院医务部,浙江出入境检验检疫局技术中心,浙江省疾病预防控制中心病毒检测所
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目的 建立和评价鉴别新甲型H1N1、甲型和乙型流行性感冒(简称流感)病毒的单管多重荧光定量RT-PCR方法.方法 2010年10月至2011年4月,采集流感样患者咽拭子样本213份.分别选用新甲型H1N1流感病毒HA基因、甲型流感病毒M基因和乙型流感病毒NP基因中的152、128和107 bp片段作为荧光定量PCR检测的靶片段,设计特异性引物和不同发光基团标记的TaqMan探针,采用体外转录构建标准品,绘制标准曲线,评价检测方法的重复性、特异度和灵敏度,并对213份流感样患者咽拭子样本进行检测及测序验证.结果 3种病毒对应的标准曲线分别为:新甲型H1N1流感病毒:Y=-3.46lgX+ 46.985；甲型流感病毒:Y=-3.49lgX +37.709;乙型流感病毒:Y=-3.51lgX +38.889,y为Ct值,lgX为病毒RNA拷贝数的对数值.质粒标准曲线的方差系数为0.998,灵敏度达到每个反应102拷贝/μl,特异度强.213份样本中检出新甲型H1N1流感病毒核酸39份(18.3％),甲型流感病毒核酸阳性63份(29.6％),乙型流感病毒核酸阳性23份(10.8％),阳性样品经过测序验证.结论 为鉴别新甲型H1N1、甲型和乙型流感病毒建立的单管多重荧光定量RT-PCR方法快速、特异且灵敏.
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