【摘 要】
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目的 探讨miR-204-5p对缺氧复氧诱导大鼠心肌细胞H9C2氧化应激的调控作用机制.方法 体外培养大鼠胚胎心肌细胞H9C2,构建心肌细胞缺氧/复氧模型.实验分为空白组、缺氧复氧组、缺氧复氧+miR-con组、缺氧复氧+miR-204-5p组、缺氧复氧+miR-204-5p+pcDNA组、缺氧复氧+miR-204-5p+pcDNA-蛋白质酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)组.实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blotting)检测miR-204-5p和PTP1
【机 构】
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汉川市人民医院心血管科,湖北 汉川431600
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目的 探讨miR-204-5p对缺氧复氧诱导大鼠心肌细胞H9C2氧化应激的调控作用机制.方法 体外培养大鼠胚胎心肌细胞H9C2,构建心肌细胞缺氧/复氧模型.实验分为空白组、缺氧复氧组、缺氧复氧+miR-con组、缺氧复氧+miR-204-5p组、缺氧复氧+miR-204-5p+pcDNA组、缺氧复氧+miR-204-5p+pcDNA-蛋白质酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)组.实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blotting)检测miR-204-5p和PTP1B的表达.双荧光素酶报告基因实验和Western blotting验证miR-204-5p和PTP1B的靶向调控关系.四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色(MTT)法检测心肌细胞存活率.试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)、心肌肌钙蛋白(cTnT)、超氧化物歧化酶(SOD)、活性氧簇(ROS)和丙二醛(MDA)水平变化.流式细胞术检测心肌细胞凋亡情况.结果 缺氧复氧处理可显著抑制心肌细胞miR-204-5p表达,促进PTP1B表达.PTP1B是miR-204-5p的靶基因,miR-204-5p可负性调控PTP1B的表达.缺氧复氧处理显著抑制细胞存活,降低SOD水平,提高LDH、ROS和MDA水平,促进细胞凋亡.过表达miR-204-5p可降低LDH、ROS和MDA水平,促进细胞存活,降低细胞凋亡;过表达PTP1B可部分削弱miR-204-5p过表达对缺氧复氧诱导心肌细胞凋亡和氧化应激的影响.结论 miR-204-5p通过靶向下调PTP1B抑制心肌细胞氧化应激,促进细胞存活,抑制细胞凋亡,对心肌细胞发挥保护作用.
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