【摘 要】
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为研究水通道蛋白8 (aquaporin 8,AQP8)的结构和功能,构建AQP8原核表达载体,表达纯化GST-AQP8融合蛋白。PCR扩增小鼠AQP8羧基端270bp的特异序列,定向连接到pGEX-4T-1载体,构
【机 构】
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潍坊学院生物与农业工程学院/山东省高校生物化学与分子生物学重点实验室;
【基金项目】
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山东省优秀中青年科学家科研奖励基金项目(BS2013SW036);潍坊市科学技术发展计划资助项目(2017GX022);潍坊学院博士科研基金项目(2012BS20)
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为研究水通道蛋白8 (aquaporin 8,AQP8)的结构和功能,构建AQP8原核表达载体,表达纯化GST-AQP8融合蛋白。PCR扩增小鼠AQP8羧基端270bp的特异序列,定向连接到pGEX-4T-1载体,构建原核表达载体pGEX-4T-1/AQP8,转化大肠杆菌表达菌株BL21,IPTG诱导表达GST-AQP8融合蛋白,并对融合蛋白进行亲和层析纯化。酶切鉴定和DNA测序结果表明p GEX-4T-1/AQP8表达载体构建成功; SDS-PAGE结果证实GST-AQP8融合蛋白有效表达且成功纯化。本研究成功制备高纯度的GST-AQP8融合蛋白,为进一步探究AQP8的结构和功能提供基础。
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