【摘 要】
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为研究免疫抑制信号通路程序性细胞死亡因子-1（programed cell death 1, PD-1）及其配体-1（ligands of programmed death-1,PD-L1）在犬肿瘤等免疫抑制类疾病中发挥的作用,进一步寻求治疗肿瘤的方法和手段,试验根据在GenBank中查询的犬PD-1及PD-L1基因序列信息,结合生物信息学技术,以及在其他种源中二者蛋白质结构研究的相关结果,克隆编
【基金项目】
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国家自然科学基金面上项目（31672540）； 新乡学院青年骨干教师项目（1244160006）；
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为研究免疫抑制信号通路程序性细胞死亡因子-1（programed cell death 1, PD-1）及其配体-1（ligands of programmed death-1,PD-L1）在犬肿瘤等免疫抑制类疾病中发挥的作用,进一步寻求治疗肿瘤的方法和手段,试验根据在GenBank中查询的犬PD-1及PD-L1基因序列信息,结合生物信息学技术,以及在其他种源中二者蛋白质结构研究的相关结果,克隆编码胞外区主要结构域的基因片段,构建相应原核表达载体并诱导表达,并应用Western-blot对目标蛋白质产物进行鉴定。结果表明:成功构建了表达犬PD-1（25～168 aa）及PD-L1（19～238 aa）胞外区主要结构域的原核重组表达载体pET-30a-PD-1和pET-30a-PD-L1,诱导表达的目标蛋白质产物分子质量分别约为27 ku和33 ku,二者均以包涵体形式表达,纯化后蛋白质产物纯度可达到80%,且均能够被商品化抗体特异性识别,具有良好的免疫原性。
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