【摘 要】
：
目的 构建GPI锚定蛋白基因与B7-1分子融合的原核高效表达载体(GPI-B7-1),观察融合蛋白的抗肿瘤效应.方法 分别从新鲜胎盘和ConA刺激的外周血单核细胞中克隆人胎盘碱性磷酸酶(
【机 构】
：
浙江大学医学院附属第二医院肿瘤外科,上海交通大学附属新华医院普外科,浙江中医药大学附属杭州市第三人民医院,浙江大学医学院附属第二医院外科
论文部分内容阅读
目的 构建GPI锚定蛋白基因与B7-1分子融合的原核高效表达载体(GPI-B7-1),观察融合蛋白的抗肿瘤效应.方法 分别从新鲜胎盘和ConA刺激的外周血单核细胞中克隆人胎盘碱性磷酸酶(hPLAP-1)C末端信号肽序列(GPI)和CD80(B7-1)基因.利用PCR技术将GPI和B7-1胞外编码区基因进行融合,并将融合基因亚克隆入原核表达载体(pET-30a)中.重组载体pET-30a-GPI-B7-1转化表达菌株E.coli BL,纯化GPI-B7-1融合蛋白,SDS-PAGE、Western blot分析鉴定其免疫活性.结果 PCR和RT-PCR产物经电泳鉴定,在100～250 bp处可见到133 bp的GPI目的 条带.在750 bp左右可见到792 bp的B7-1胞外编码区基因目的 条带.重组载体pET-30a-GPI-B7-1经PCR检测获得900 bp左右的目的 片段,经EcoRⅠ、SAlⅠ双酶切鉴定,得到5000 bp和900 bp左右大小2个片段,实现了融合蛋白(GPI-B7-1)在大肠杆菌中的高效表达,在非变性条件下纯化该融合蛋白,SDS-PAGE分析显示,表达蛋白的分子量约为38 kDa,Western blotting证实38 kDa处出现一条特异的显色带,该融合蛋白即为目的 蛋白.结论 GPI-B7-1表达载体可在大肠杆菌中高效表达获取融合蛋白,为肿瘤免疫治疗奠定了基础.
其他文献
背景:颅面硬组织结构在年龄、性别、地区及种族方面存在着差异.已有一些学者对国内一部分城市错(牙合)畸形人群进行了X射线头影测量研究,取得了颅面硬组织结构头影测量正常值
[目的]研究姜黄素对人宫颈癌细胞Caski侵袭转移的影响并探讨其可能的机制.[方法]以10,25,50 μmol/L姜黄素处理Caski细胞24,48,72 h后,MTT法检测其对Caski细胞的生长抑制作用
通过分析网络成瘾患者与正常受试者的自发脑电复杂性的差异,研究网络成瘾患者自发脑电复杂性的特点.对9名网络成瘾患者(实验组)和9名正常受试者(对照组)在安静状态下的自发脑
目的 通过体外实验,观察利巴韦林注射液对肠道病毒71型(EV71)病毒在横纹肌肉瘤传代细胞(RD-A细胞)复制的抑制作用和体外灭活作用.方法 使用在2008年4月安徽阜阳疫情中分离到
目的 检测帕金森病(PD)大鼠成模前、后的脑干听觉诱发电位(BAEP),探讨BAEP作为PD早期诊断、病情评定的客观指标的价值.方法 35只SD大鼠随机分为PD模型组和假手术组.记录PD大
目的 利用大肠杆菌表达系统制备人乳头状瘤病毒6型(human papillomavirus type 6,HPV-6)类病毒颗粒(virus-like particles,VLP)并研究其免疫原性.方法 在大肠杆菌ER2566中表
目的 评价线粒体ATP敏感性钾通道在头部浅低温减轻大鼠全脑缺血再灌注损伤中的作用.方法 健康雄性SD大鼠32只,体重200～250 g,随机分为4组(n=8):假手术组(S组)、全脑缺血再灌注
目的 观察去骨瓣减压术对大鼠缺血缺氧性脑损伤后核因子(NF)-κB表达及细胞凋亡的影响.方法 将60只SD大鼠随机分3组:脑缺血(IS)组、脑缺血+去骨瓣减压(IS+DC)组、去骨瓣减压(
目的 探讨早产儿脑室内出血(IVH)发病相关危险因素及护理干预.方法 调查160例早产儿胎龄、体质量、重度窒息情况,通过床旁颅脑彩超确诊42例早产儿IVH,记录IVH临床表现、彩超
目的 用连锁分析法对1个中国人显性视网膜色素变性家系进行已知位点的筛查,寻找其致病基因.方法 随机选取已知致病基因上下约5cM(JB)范围内的27对微卫星标记,确立单倍型,用两