论文部分内容阅读
【摘 要】 目的：观察白番红花球茎提取物对小鼠的急性毒性反应，评价其安全性，为其新药开发和临床安全用药提供理论依据。方法：采用急性毒性实验方法，对小鼠ig不同浓度（8880、9386、9920、10486、11100g/kg）的白番红花球茎提取物，观察并记录小鼠的活动和毒性反应；采用改良寇氏法计算白番红花球茎提取物对小鼠ig的半数致死量（LD50）和95%的可信区间。结果：白番红花球茎提取物对小鼠7d内ig的LD50为10046g/kg，其95%的可信区间为9142～10950g/kg。结论：白番红花球茎提取物有较小的毒性，该结果为其药效学实验和临床应用提供了科学依据。
【关键词】 白番红花球茎；急性毒性；半数致死量
【中图分类号】R2855 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2015）05-0023-02
Acute Toxicity of the Crocus Alatavicus Regel et Sem Sativus Corms Extract on Mice
YANG Yuanhua1，LIU Jing1，HAN Ruchun1，CHEN Yuanyuan1，SUN Yan2，ZHOU Dongmei2，NIU Rong2
1Xinjiang Yining health school，Yining 835000，China；2Xinjiang Yili Prefecture friendship hospital，Yining 835000，China
Abstract：[WTHZ]Objective[WTBZ] To observe acute toxicity of the Crocus alatavicus Regel et Sem sativus corms extract in mice， evaluate its safety， provide a theoretical basis for new drug research and clinical safety of medication.[WTHZ]Methods[WTBZ] To record its activity and toxicity in mice by Acute toxicity test method，The mouse ig with different concentrations（8880、9386、9920、10486、11100g/kg）of Crocus alatavicus Regel et Sem sativus corms extract；Using Karber method modified to calculate Crocus alatavicus Regel et Sem corms extract on mice ig median lethal dose（LD50）and 95% confidence intervals.[WTHZ]Results[WTBZ] Crocus alatavicus Regel et Sem sativus corms extract on mice 7d ig LD50 is 10046g/kg，Its 95% confidence interval 9142～10950g/kg.[WTHZ]Conclusion[WTBZ]Crocus alatavicus Regel et Sem sativus corms extract had lower toxicity， It provide a scientific basis for pharmacodynamic experimental and clinical applications.
Keywords：Crocus alatavicus Regel et Sem sativus corms；Acute toxicity；Median lethal dose
白番红花（Crocus alatavicus Regel et Sem）是鸢尾科番红花属的多年生草本植物，主要分布在新疆伊犁地区各县的山坡上（海拔1200～3000m），物产资源丰富。白番红花球茎是白番红花的地下球茎，又称土马钱子，是哈萨克族民间常用药物，在民间主要是捣碎放入马奶子中服用，用于治疗风寒湿痹、跌打肿痛、腰脚无力等疾病。目前该药的文献记载很少，只是对白番红花的植物形态有所描述[1-3] ，对白番红花球茎提取物毒性研究未见报道。本实验对白番红花球茎提取物进行了小鼠灌胃急性毒性研究[4-6]，为其进一步药效学实验提供理论依据。
1 材料与仪器
11 药材 白番红花球茎采于新疆伊犁察布查尔锡伯自治县海拔1500米的山坡上，经新疆维吾尔自治区药品检验所主任药师刘勇民鉴定为鸢尾科番红花属多年生植物白番红花的球茎。药材晾干，粉碎成粗粉备用。
12 动物 昆明小鼠，SPF级，雌雄各半，18～22g，由新疆医科大学动物实验中心提供，许可证号：SCXK（新）2003-001，雌性未产无孕，自由摄食和饮水，室温保持18～22℃，相对湿度40%～70%，实验前适应3d。
13 仪器 电子天平；RE-2000A旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；SHZ-D（Ⅲ）循环水式真空泵（上海卫凯仪器设备有限公司卫凯）；电热恒温水浴锅（北京永光明医疗仪器厂）；注射器；小鼠灌胃器等。
2 方法
21 药物制备 称取白番红花球茎粗粉100g，加1000ml 60%的乙醇于水浴上加热回流2h，过滤，提取2次，合并滤液，于旋转蒸发仪上浓缩至无醇味，得浓缩液54ml（每毫升浓缩液相当于185g生药）备用，用时再用蒸馏水配成相应浓度。 22 急性毒性实验 预试验找出药物对小鼠的最大不致死量Dn为8880g/kg和最小全致死量Dm为11100g/kg，共分5组，求出组间比r为1057；正式试验：选取昆明小鼠50只，雌雄各半，随机分成5组，每组10只，给药前12h均禁食不禁水，分别按照预试验结果8880、9386、9920、10486、11100g/kg药物剂量，依次给5组小鼠灌胃一次，连续观察并记录7d内出现的中毒症状、死亡情况，并对死亡小鼠立即解剖，肉眼观察记录主要损害的器官及病理变化情况，最后根据各组动物死亡数，计算出小鼠口服白番红花球茎提取物的半数致死量（LD50）和95%的可信区间。
3 结果
31 一般症状观察 白番红花球茎提取物随剂量的升高，小鼠表现为安静、活动减少、饮食减少，未死亡小鼠观察4～6d基本恢复正常。中毒死亡的小鼠主要在72h内，中毒死亡的小鼠外观主要表现为嘴、鼠尾、眼球等处发紫；解剖后发现胃肠胀气，肝脏发黑。
32 LD50测定 小鼠ig白番红花球茎提取物，随剂量增大死亡率增加，各剂量组小鼠死亡状况见表1，根据改良寇氏（Karber）法计算半数致死量（LD50）为10046g/kg，其95%可信区间为9142～10950g/kg。
4 讨论
急性毒性实验是药物安全性评价的第一步，为全身给药的毒性研究内容之一，它可以为今后长期毒性实验、特殊毒性实验和药效学实验等研究的剂量选择和指标设计提供参考依据。本次急性毒性实验的结果小鼠ig白番红花球茎提取物的LD50为10046g/kg，其95%可信区间为9142～10950g/kg，如按白番红花球茎生药、药理实验中动物间和动物与人体间的等效剂量换算[7]，相当于成人（60kg）用6697g生药量，而该药材在民间最高用量为9g，则相当于成人用量的74倍，根据化学物质的急性毒性分级标准，该药材属低毒药材。由于该药材有一定毒性，因此在哈萨克族民间使用时一定要注意适应症、剂量、疗程等，以防毒性反应的发生。
参考文献
[1]新疆植物志编辑委员会.新疆植物志（第六卷）[M].乌鲁木齐：新疆科技卫生出版社，1996：563.
[2]刘勇民.维吾尔药志（下册）[M].乌鲁木齐：新疆科技卫生出版社，1999：253.
[3]中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志（第十六卷第一分册）[M].北京：科学出版社，1985：122.
[4]徐淑云，卞如濂，陈修.药理实验方法学[M].3版.北京：人民卫生出版社，2002.
[5]刘毅，郑兴，姚旭，等.灯盏乙素急性毒性研究[J].时珍国医国药，2012，23（11）：2703.
[6]杨丽娟，张帆，蔡冬梅，等.哈药准噶尔乌头对小鼠的急性毒性分析[J].时珍国医国药，2012，23（10）：2542.
[7]黄继汉，黄晓晖，陈志扬，等.药理实验中动物间和动物与人体间的等效剂量换算[J].中国临床药理学与治疗学，2004，9（9）：1069.
（收稿日期：20141210）
【关键词】 白番红花球茎；急性毒性；半数致死量
【中图分类号】R2855 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2015）05-0023-02
Acute Toxicity of the Crocus Alatavicus Regel et Sem Sativus Corms Extract on Mice
YANG Yuanhua1，LIU Jing1，HAN Ruchun1，CHEN Yuanyuan1，SUN Yan2，ZHOU Dongmei2，NIU Rong2
1Xinjiang Yining health school，Yining 835000，China；2Xinjiang Yili Prefecture friendship hospital，Yining 835000，China
Abstract：[WTHZ]Objective[WTBZ] To observe acute toxicity of the Crocus alatavicus Regel et Sem sativus corms extract in mice， evaluate its safety， provide a theoretical basis for new drug research and clinical safety of medication.[WTHZ]Methods[WTBZ] To record its activity and toxicity in mice by Acute toxicity test method，The mouse ig with different concentrations（8880、9386、9920、10486、11100g/kg）of Crocus alatavicus Regel et Sem sativus corms extract；Using Karber method modified to calculate Crocus alatavicus Regel et Sem corms extract on mice ig median lethal dose（LD50）and 95% confidence intervals.[WTHZ]Results[WTBZ] Crocus alatavicus Regel et Sem sativus corms extract on mice 7d ig LD50 is 10046g/kg，Its 95% confidence interval 9142～10950g/kg.[WTHZ]Conclusion[WTBZ]Crocus alatavicus Regel et Sem sativus corms extract had lower toxicity， It provide a scientific basis for pharmacodynamic experimental and clinical applications.
Keywords：Crocus alatavicus Regel et Sem sativus corms；Acute toxicity；Median lethal dose
白番红花（Crocus alatavicus Regel et Sem）是鸢尾科番红花属的多年生草本植物，主要分布在新疆伊犁地区各县的山坡上（海拔1200～3000m），物产资源丰富。白番红花球茎是白番红花的地下球茎，又称土马钱子，是哈萨克族民间常用药物，在民间主要是捣碎放入马奶子中服用，用于治疗风寒湿痹、跌打肿痛、腰脚无力等疾病。目前该药的文献记载很少，只是对白番红花的植物形态有所描述[1-3] ，对白番红花球茎提取物毒性研究未见报道。本实验对白番红花球茎提取物进行了小鼠灌胃急性毒性研究[4-6]，为其进一步药效学实验提供理论依据。
1 材料与仪器
11 药材 白番红花球茎采于新疆伊犁察布查尔锡伯自治县海拔1500米的山坡上，经新疆维吾尔自治区药品检验所主任药师刘勇民鉴定为鸢尾科番红花属多年生植物白番红花的球茎。药材晾干，粉碎成粗粉备用。
12 动物 昆明小鼠，SPF级，雌雄各半，18～22g，由新疆医科大学动物实验中心提供，许可证号：SCXK（新）2003-001，雌性未产无孕，自由摄食和饮水，室温保持18～22℃，相对湿度40%～70%，实验前适应3d。
13 仪器 电子天平；RE-2000A旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；SHZ-D（Ⅲ）循环水式真空泵（上海卫凯仪器设备有限公司卫凯）；电热恒温水浴锅（北京永光明医疗仪器厂）；注射器；小鼠灌胃器等。
2 方法
21 药物制备 称取白番红花球茎粗粉100g，加1000ml 60%的乙醇于水浴上加热回流2h，过滤，提取2次，合并滤液，于旋转蒸发仪上浓缩至无醇味，得浓缩液54ml（每毫升浓缩液相当于185g生药）备用，用时再用蒸馏水配成相应浓度。 22 急性毒性实验 预试验找出药物对小鼠的最大不致死量Dn为8880g/kg和最小全致死量Dm为11100g/kg，共分5组，求出组间比r为1057；正式试验：选取昆明小鼠50只，雌雄各半，随机分成5组，每组10只，给药前12h均禁食不禁水，分别按照预试验结果8880、9386、9920、10486、11100g/kg药物剂量，依次给5组小鼠灌胃一次，连续观察并记录7d内出现的中毒症状、死亡情况，并对死亡小鼠立即解剖，肉眼观察记录主要损害的器官及病理变化情况，最后根据各组动物死亡数，计算出小鼠口服白番红花球茎提取物的半数致死量（LD50）和95%的可信区间。
3 结果
31 一般症状观察 白番红花球茎提取物随剂量的升高，小鼠表现为安静、活动减少、饮食减少，未死亡小鼠观察4～6d基本恢复正常。中毒死亡的小鼠主要在72h内，中毒死亡的小鼠外观主要表现为嘴、鼠尾、眼球等处发紫；解剖后发现胃肠胀气，肝脏发黑。
32 LD50测定 小鼠ig白番红花球茎提取物，随剂量增大死亡率增加，各剂量组小鼠死亡状况见表1，根据改良寇氏（Karber）法计算半数致死量（LD50）为10046g/kg，其95%可信区间为9142～10950g/kg。
4 讨论
急性毒性实验是药物安全性评价的第一步，为全身给药的毒性研究内容之一，它可以为今后长期毒性实验、特殊毒性实验和药效学实验等研究的剂量选择和指标设计提供参考依据。本次急性毒性实验的结果小鼠ig白番红花球茎提取物的LD50为10046g/kg，其95%可信区间为9142～10950g/kg，如按白番红花球茎生药、药理实验中动物间和动物与人体间的等效剂量换算[7]，相当于成人（60kg）用6697g生药量，而该药材在民间最高用量为9g，则相当于成人用量的74倍，根据化学物质的急性毒性分级标准，该药材属低毒药材。由于该药材有一定毒性，因此在哈萨克族民间使用时一定要注意适应症、剂量、疗程等，以防毒性反应的发生。
参考文献
[1]新疆植物志编辑委员会.新疆植物志（第六卷）[M].乌鲁木齐：新疆科技卫生出版社，1996：563.
[2]刘勇民.维吾尔药志（下册）[M].乌鲁木齐：新疆科技卫生出版社，1999：253.
[3]中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志（第十六卷第一分册）[M].北京：科学出版社，1985：122.
[4]徐淑云，卞如濂，陈修.药理实验方法学[M].3版.北京：人民卫生出版社，2002.
[5]刘毅，郑兴，姚旭，等.灯盏乙素急性毒性研究[J].时珍国医国药，2012，23（11）：2703.
[6]杨丽娟，张帆，蔡冬梅，等.哈药准噶尔乌头对小鼠的急性毒性分析[J].时珍国医国药，2012，23（10）：2542.
[7]黄继汉，黄晓晖，陈志扬，等.药理实验中动物间和动物与人体间的等效剂量换算[J].中国临床药理学与治疗学，2004，9（9）：1069.
（收稿日期：20141210）