【摘 要】
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目的 评价血小板在脂多糖(LPS)激活中性粒细胞致小鼠肺微血管内皮细胞(PMVEC)损伤中的作用.方法 C3H/HeN小鼠,6～8周龄,雌雄不拘,体重18～25 g,原代培养PMVEC,采用二次离心法分
【机 构】
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解放军第四零一医院崂山分院麻醉科,第二军医大学长海医院麻醉科,第二军医大学长海医院心胸外科
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目的 评价血小板在脂多糖(LPS)激活中性粒细胞致小鼠肺微血管内皮细胞(PMVEC)损伤中的作用.方法 C3H/HeN小鼠,6～8周龄,雌雄不拘,体重18～25 g,原代培养PMVEC,采用二次离心法分离血小板,采用密度梯度离心法分离中性粒细胞.取2～5代的PMVEC,以105个/ml密度接种于12孔(lml/孔)或6孔(2 ml/孔)培养板,采用随机数字表法,将其随机分为4组(n=31):LPS组、血小板组(P组)、中性粒细胞组(N组)和血小板+中性粒细胞组(PN组).4组均加入终浓度为1μg/ml的LPS,P组和N组分别加入血小板和中性粒细胞,PN组加入血小板和中性粒细胞,血小板和中性粒细胞的终浓度分别为5× 107个/ml和5×105个/ml.分别于孵育1、6、12、18和24h时每组取1孔,相差显微镜下观察内皮细胞形态和活化情况；于孵育24h时每组取1孔,荧光显微镜下观察细胞存活情况；分别于孵育1、6、12、18和24h时取6孔,采用流式细胞术测定内皮细胞存活率、凋亡率及活化率.结果与LPS组比较,N组和P组内皮细胞形态、数量均无明显改变,而PN组活化的内皮细胞增加,活细胞数量减少；与LPS组比较,PN组LPS孵育6～24h时细胞存活率降低,细胞凋亡率升高,LPS孵育1～24h时细胞活化率升高,P组和N组LPS孵育6、12 h时细胞活化率升高(P＜0.05),其余指标差异均无统计学意义(P＞0.05)；与N组或P组比较,PN组LPS孵育6～24h时细胞存活率降低,细胞凋亡率和细胞活化率升高(P＜0.05).结论 血小板在LPS激活中性粒细胞致小鼠PMVEC损伤中起决定性作用.
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