GST-p60PLAD融合蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达和纯化

来源 :第四军医大学学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wang____jiang
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目的:制备GST—p60PLAD融合蛋白.方法:依据人p60PLAD氨基酸序列,根据大肠杆菌偏爱密码子进行反翻译,获得适合在大肠杆菌中表达的基因序列.根据该基因序列设计五条引物,用重叠延伸PCR法获得编码人p60PLAD的基因,进而将其克隆人原核表达载体pGEX-4T-2中,转化大肠杆菌BLR(DE3)polys.经IPTG诱导表达后收集菌体,超声裂解,将上清液经GSTrapFF亲和层析柱纯化、经HiTrap脱盐柱脱盐,用SDS—PAGE进行分析.结果:成功构建重组质粒pGEX-4T-2-p60PLAD,
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