双向启动子（bidirectional promoters,BDPs）为自然界常见表达元件之一，能够为遗传电路设计、代谢途径组装和优化提供新工具，但目前缺乏针对BDPs的高通量筛选手段。为了高通量筛选性能优越的BDPs，用于代谢工程中的多基因调控，本研究构建了一种BDPs活性探针载体p19BDP。该探针基于绿色荧光瞬时表征蛋白传感器蛋白1（green fluorescent sensor for transiently expressed proteins 1,gSTEP1）和瞬时表征蛋白传感器蛋白质标签（sensor for transiently expressed proteins tag,STEPtag）相互作用后会产生荧光的原理，以“头对头”的方式将gSTEP1基因与STEPtag基因连入p19-0质粒（删除tac启动子的pXMJ19质粒改造获得）获得探针载体，在两个基因中间插入BDPs序列后，通过检测荧光信号初步表征BDPs活性。通过转录组数据分析筛选出了8个谷氨酸棒杆菌（Corynebacterium glutamicum）中的BDPs，利用探针载体p19BDP对其活性进行表征，其中两个诱导型启动子BDPcat和BDPicl的荧光值较诱导前分别提高了15.9倍和6.2倍，且在一定范围内荧光强度与诱导剂浓度呈正相关；其他6个内源BDPs（BDP1～BDP6）中，BDP6的荧光强度是对照启动子BDPcat（未诱导）的6.8倍。该探针载体不影响菌体生长，且gSTEP1/STEPtag复合物形成后其荧光值保持稳定。以上结果表明，探针载体p19BDP能够灵敏、有效地表征谷氨酸棒杆菌中BDPs强度。本研究为谷氨酸棒杆菌高通量挖掘天然BDPs提供了有效工具，同时为原核生物中BDPs筛选提供了新的思路。