ALK5激活型突变体在肾癌细胞中的表达及功能

来源 :现代肿瘤医学 | 被引量 : 0次 | 上传用户：ktzgy

【摘要】

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目的：构建ALK5激活型真核表达质粒Flag-ALK5 T204D,证实融合蛋白在肾癌细胞内表达,并验证其对TGF-β信号通路的激活作用。方法：以野生型ALK5质粒为模板,采用重叠延伸PCR方法进

【作者】

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李英杰

【机构】

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肥城矿业中心医院肾内科

【出处】

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现代肿瘤医学

【发表日期】

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2016年8期

【关键词】

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ALK5 TGF-Β 定点突变 ALK5 TGF-β site-directed mutation

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目的：构建ALK5激活型真核表达质粒Flag-ALK5 T204D,证实融合蛋白在肾癌细胞内表达,并验证其对TGF-β信号通路的激活作用。方法：以野生型ALK5质粒为模板,采用重叠延伸PCR方法进行定点突变;将构建的重组质粒测序并转染到肾癌细胞ACHN中,提取细胞蛋白进行Western blot检测;利用双荧光素酶报告基因分析,检测该突变体对TGF-β信号通路典型靶基因启动子的激活作用。结果：对ALK5的表达序列进行定点突变,构建了ALK5激活型真核表达质粒Flag-ALK5 T204D;Western

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