烟草转基因检测方法的研究

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通过试验研究,提出了烟草转基因检测方法和标准,首先提取样品DNA采用260~280nm波长扫描测定提取物DNA浓度和纯度,并利用叶绿体不编码蛋白基因序列PCR扩增确定模板质量,同时进行35s启动子,NOS终止子的PCR扩增,对于未出现特异性扩增的样品进行35s和NOS的巢式PCR反应,对于出现目标长度片段扩增的样品再次提取DNA重复检测,并利用限制性内切酶酶切、巢式PCR、探针杂交和目的基因序列扩增进行验证,确定所转目的基因种类.并应用竞争性PCR测定样品中转基因阳性成分含量.“,”DNA of the transgenic tobacco was extracted and its coneentraction and purity in the extract was estimated by measuremen of OD at 260 ~ 280nm with UV-spectrophotometer.PCR amplification of chloroplast nonconding DNA region sequence also be used to check the quality of DNA in the extract,then PCR amplification for 35S promoter and NOS terminator was carried out simultaneously.Nested PCR of 35S and NOS was conducted for no specific PCR band in the screening.DNA was re-extracted and PCR screening was repeated for the sample without specific PCR in the screening.Restriction enzyme analysis of 35S and NOS PCR products,nested PCR,probe hybrid and amplification for GMT target gene were taken to confirm the screening results and determine the kind of target transgene and measure the content of GMT with competitive PCR system.
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