【摘 要】
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本实验首次借助自主开发的病原体灭活免抽提直扩缓冲液抽提禽流感病毒RN A,建立了H5亚型禽流感病毒(avian influenza virus H5,AIV-H5)实时荧光反转录重组酶聚合酶扩增(real-time reverse transcription recombinase polymerase amplification,rRT-RPA)检测方法,并对该方法的特异性、敏感性、可重复性及可靠性进行评价.结果显示,该方法可准确鉴别出AIV-H5,最佳扩增引物和反应温度分别为H5-HA RPA F1/
【机 构】
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佛山科学技术学院,广东佛山523231;深圳海关动植物检验检疫技术中心,广东深圳518045;深圳海关动植物检验检疫技术中心,广东深圳518045;深圳市检验检疫科学研究院,广东深圳518001
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本实验首次借助自主开发的病原体灭活免抽提直扩缓冲液抽提禽流感病毒RN A,建立了H5亚型禽流感病毒(avian influenza virus H5,AIV-H5)实时荧光反转录重组酶聚合酶扩增(real-time reverse transcription recombinase polymerase amplification,rRT-RPA)检测方法,并对该方法的特异性、敏感性、可重复性及可靠性进行评价.结果显示,该方法可准确鉴别出AIV-H5,最佳扩增引物和反应温度分别为H5-HA RPA F1/R1/P1和39℃,其敏感性与国家标准实时荧光RT-PCR检测法相当,灵敏度可达到10个基因拷贝;该方法与禽流感病毒H7、H9其他亚型病毒和传染性支气管炎病毒(infectious bronchitis virus,IBV)、新城疫病毒(newcastle disease virus,NDV)等常见禽呼吸道传染病病原无交叉反应,特异性强;同时该法具有良好的重复性.小规模田间实验显示,该方法用于AIV-H5普查,监测结果可靠.本实验所建立的AIV-H5 rRT-RPA检测方法可满足AIV-H5现场快速检测的需求,具有广阔的应用前景.
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