论文部分内容阅读
目的
研究轮状病毒非结构蛋白4的86～175位氨基酸肽段(amino acid residues 86 to 175 of nonstructural protein 4，NSP486-175)对大鼠神经元细胞内钙离子的干扰及损伤作用。
方法利用前期制备好的活性NSP486-175蛋白处理原代培养的大鼠神经元细胞，观察蛋白质处理后细胞的形态变化，检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性；Fluo-3 AM标记细胞内游离的钙离子，蛋白质处理细胞后，用激光共聚焦显微镜检测神经元细胞内钙离子浓度变化。
结果正常生长的神经元细胞胞体丰满，呈不规则形或梭形，细胞突起数量较多并且较长，纯化的NSP486-175蛋白刺激后的大鼠神经元细胞出现明显的细胞病变效应，细胞密度稀疏，细胞胞体皱缩，细胞突起数量减少；蛋白质处理组细胞培养液中的LDH活性均增大；外源性添加NSP486-175能引起神经元细胞内荧光强度和分布改变。
结论NSP486-175对大鼠神经元细胞具有损伤作用，这可能与它导致细胞内钙库释放引起的钙离子浓度升高有关，为轮状病毒肠道外播散感染和致病提供了一定的理论依据。