【摘 要】
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目的 表达鼠抑铁素2(1cn2)蛋白,并检测表达产物的生物学活性.方法 从小鼠RAW264.7巨噬细胞提取总RNA,逆转录合成cDNA,以cDNA为模板,PCR扩增lcn2基因片段,插入原核表达质粒pET
【机 构】
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重庆医科大学免疫学教研室,重庆,400016
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目的 表达鼠抑铁素2(1cn2)蛋白,并检测表达产物的生物学活性.方法 从小鼠RAW264.7巨噬细胞提取总RNA,逆转录合成cDNA,以cDNA为模板,PCR扩增lcn2基因片段,插入原核表达质粒pET-32a(+),转化大肠杆菌BL21(DE3)plysS,用IPTG诱导表达.表达产物经His-tag in-gel stain鉴定后.采用Ni2+-NTA亲和层析纯化,并检测其生物学活性.结果 经核苷酸序列测定和酶切鉴定,表明重组质粒pET-32a(+)-lcn2构建正确.表达的重组蛋白经SDS-PAGE分析,相对分子质量约为21 000,表达量占菌体总蛋白的35%,主要以包涵体形式存在.纯化后蛋白浓度为1.0 g/L,并对大肠杆菌和乙型链球菌生长有一定的抑制作用.结论 成功地在原核细胞中表达了重组lcn2蛋白,且表达的蛋白具有一定的抑菌作用.
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