【摘 要】
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目的:探讨胞苷脱氨酶(CDA)基因沉默在治疗人慢性髓系白血病(CML)中的潜在价值.方法:通过RT-PCR和Western blot检测CML患者和造血干细胞移植供体的骨髓单个核细胞中的CDA表达.
【机 构】
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西安市儿童医院血液肿瘤科 陕西西安710003暨南大学第二临床医学院南方科技大学第一附属医院深圳市人民医院病理科 广东深圳518020;西安市儿童医院中心实验室 陕西西安710003;深圳市人民医院肿
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目的:探讨胞苷脱氨酶(CDA)基因沉默在治疗人慢性髓系白血病(CML)中的潜在价值.方法:通过RT-PCR和Western blot检测CML患者和造血干细胞移植供体的骨髓单个核细胞中的CDA表达.对CML KCL-22细胞系转染shRNA和过表达CDA的pBS/U6-Neo质粒来诱导CDA基因沉默或过表达.通过细胞计数试剂盒8(CCK-8)测定和细胞集落形成实验评价细胞增殖,通过流式细胞仪检测细胞凋亡.此外,将0.2 mL不同处理的细胞悬浮液(106个细胞/mL)注射到裸鼠中建立裸鼠肿瘤异种移植模型.结果:与造血干细胞移植供体相比,CML患者的骨髓单个核细胞中的CDAmRNA和蛋白表达显著升高(P＜0.05).转染shRNA-CDA显著降低了KCL-22细胞的细胞活力和细胞集落数(P＜0.05).与对照组(4.32％)相比,shRNA-CDA组(13.45％)的细胞凋亡率显著升高(P＜0.05).与对照组相比,shRNA-CDA组的BCL-2蛋白表达水平显著降低,而cleaved caspase-3显著升高(P＜0.05).与对照组相比,shRNA-CDA组的PI3K蛋白表达水平和Akt磷酸化水平显著降低(P＜0.05).接种30d后,与对照组相比,shRNA-CDA组裸鼠的肿瘤重量和肿瘤体积均显著降低(P＜0.05).结论:CDA在人慢性髓系白血病中高表达,CDA基因沉默可在体内和体外抑制肿瘤细胞的生长.其机制与抑制PI3K/Akt信号通路的激活有关.
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