【摘 要】
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目的:探讨固醇调节元件结合蛋白裂解活化蛋白(SCAP)在肝星状细胞中缺失能否延缓小鼠肝纤维化进程.方法:将SCAPloxP/loxP小鼠与Lrat-Cre工具鼠繁殖得到Lrat-Cre+/+SCAPfl/fl、Lrat-Cre+/?SCAPfl/fl和Lrat-Cre?/?SCAPfl/fl小鼠,并用PCR法对小鼠基因型进行鉴定.选取4～6周龄Lrat-Cre?/?SCAPfl/fl小鼠(雄性,n=8)作为对照(Con)组,Lrat-Cre+/+SCAPfl/fl和Lrat-Cre+/?SCAPfl/fl
【机 构】
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重庆医科大学脂糖代谢性疾病重庆市重点实验室,脂质研究中心,重庆400016
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目的:探讨固醇调节元件结合蛋白裂解活化蛋白(SCAP)在肝星状细胞中缺失能否延缓小鼠肝纤维化进程.方法:将SCAPloxP/loxP小鼠与Lrat-Cre工具鼠繁殖得到Lrat-Cre+/+SCAPfl/fl、Lrat-Cre+/?SCAPfl/fl和Lrat-Cre?/?SCAPfl/fl小鼠,并用PCR法对小鼠基因型进行鉴定.选取4～6周龄Lrat-Cre?/?SCAPfl/fl小鼠(雄性,n=8)作为对照(Con)组,Lrat-Cre+/+SCAPfl/fl和Lrat-Cre+/?SCAPfl/fl小鼠(雄性,n=8)作为实验(SCAP?/?)组,均给予高脂饮食16周.称量小鼠肝重和体重,计算肝指数;检测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)水平;苏木精-伊红(HE)染色观察肝脏形态,油红O染色观察肝脏脂质积聚,天狼星红染色评估肝脏纤维化程度;RT-qPCR和Western blot检测小鼠肝组织中TGF-β/Smad信号通路相关mRNA及蛋白表达.结果:小鼠基因型鉴定结果与预期一致.提取两组小鼠原代肝星状细胞,RT-qPCR结果显示SCAP?/?小鼠肝星状细胞中SCAP mRNA表达显著降低(P<0.01),免疫荧光染色显示SCAP?/?小鼠肝星状细胞中SCAP不表达,表明SCAP?/?小鼠模型建立成功.与Con组相比,高脂饮食喂养的SCAP?/?组小鼠体重(P<0.01)和肝重(P<0.05)显著降低,但肝指数无显著差异;血清中TC水平显著降低(P<0.05),TG、AST和ALT水平无显著差异;HE及油红O染色结果显示小鼠肝脏脂肪变性和脂质积聚无显著差异;天狼星红染色显示肝脏纤维化程度减轻(P<0.05);Smad2(P<0.05)和Smad3(P<0.01)的mRNA表达显著降低;Smad2/3和p-Smad2/3蛋白水平显著降低(P<0.05).结论:肝星状细胞中SCAP缺失可延缓小鼠肝纤维化发展的进程,并与TGF-β/Smad信号通路有关.
其他文献
目的:探究机动车尾气(MVE)长期暴露引起大鼠慢性阻塞性肺疾病(COPD)发生时,气道上皮细胞中环加氧酶2(COX-2)/前列腺素E2(PGE2)/E-前列腺素类激素(EP)受体信号通路成员的表达变化.方法:(1)动物实验:健康雄性SD纯系大鼠(SPF级)16只,随机分为2组:MVE暴露组(n=8)和空白对照(CTL)组(n=8).采用MVE暴露6个月的方法建立COPD大鼠模型.造模结束后,使用Buxco小动物有创肺功能仪检测大鼠肺功能;肺组织切片行HE染色并评估肺组织病理变化;ELISA法检测大鼠支气管
目的:探讨TGF-β1/Smad3信号轴的氧连糖基化修饰(O-连接的N-乙酰葡萄糖胺修饰)对体外培养的小鼠心脏成纤维细胞(MCFs)在缺氧/复氧(H/R)后活力和分化的影响及机制.方法:原代培养的MCFs缺氧6 h再恢复常氧24 h建立细胞H/R模型,通过感染O-连接的N-乙酰葡萄糖胺转移酶(OGT)重组腺病毒提高MCFs氧连糖基化水平,将MCFs随机分组为空载腺病毒预处理+常氧(Ad.Null+Ctrl)组、空载腺病毒预处理+H/R(Ad.Null+H/R)组、OGT腺病毒预处理+常氧(Ad.OGT+C
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目的:探讨黄芪总皂苷(TAS)对脂多糖(LPS)诱导的BV2小胶质细胞炎症损伤的抗炎作用机制.方法:用CCK-8法筛选出对细胞活力无抑制的药物浓度;用浓度为1 mg/L的LPS刺激BV2细胞24 h,建立细胞炎症模型;实验分为正常组、LPS组、高剂量(75 mg/L)TAS组和低剂量(50 mg/L)TAS组;应用流式细胞术检测用药后细胞膜表面CD16/32表达情况;采用免疫荧光染色检测细胞内诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和精氨酸酶1(Arg-1)的平均荧光强度;Western blot法检测肿瘤坏死因子
目的:探讨不同低氧干预模式对大鼠快肌和慢肌萎缩的影响差异及可能的分子机制.方法:24只10周龄雄性SD大鼠分为常氧对照组(C组)、短期间歇低氧组(IH组,于12.4％O2暴露8 h/d,持续4周)和急性低氧组(AH组,连续3 d暴露于12.4％O2),每组8只.干预后测定抓力,胫骨前肌(TA,快肌)和比目鱼肌(SOL,慢肌)湿重,以及肌纤维横截面积(FCSA).Western blot法检测嘌呤霉素(Puro)和泛素(Ub)的含量,计算蛋白质累积量(Puro/Ub).使用RNA测序法筛选两种肌肉中IH/C
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目的:观察低极性20(S)-人参皂苷Rg3(S-Rg3)体外抑制人急性单核细胞白血病THP-1细胞迁移和侵袭的作用.方法:将不同浓度(0、20、40和80 mg/L)的S-Rg3加入THP-1细胞培养体系,Transwell小室检测S-Rg3抑制细胞迁移的作用.采用免疫细胞化学、免疫荧光、Western blot和RT-qPCR等多种方法,检测S-Rg3对THP1细胞黏附、迁移和侵袭相关蛋白表达的影响及其相关机制.结果:S-Rg3能有效地抑制THP-1细胞迁移,下调黏附相关蛋白N-cadherin,迁移相
目的:探讨有氧运动训练(AET)对心肌梗死(MI)小鼠的心脏保护作用,并阐明其作用机制是否与胰高血糖素样肽1受体(GLP-1R)激活有关.方法:在实验1(研究AET对MI小鼠的心脏保护作用及对心脏组织中GLP-1R表达的影响)中,67只小鼠分为3组:假手术(sham)组(n=14)、MI组(n=28)和MI+AET组(n=25).MI组和MI+AET组采用结扎左冠状动脉前降支建立MI模型,且MI+AET组在模型建立后进行为期4周的AET处理.在实验2[研究GLP-1R敲除(GLP-1R KO)对AET心脏
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