【摘 要】
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为了建立适宜不同来源花生种质遗传差异分析的MITE反应体系,本研究从反应体系总量、Taq PCR Mix用量、引物浓度、模板DNA浓度及退火温度、循环次数方面对反应体系进行优化,得到的最佳反应体系为:反应总体积10μL,模板DNA 20 ng,引物(15μmol/L)2μL,Taq PCR Mix 5μL.反应程序为95℃预变性3 min;95℃变性30 s,58℃退火40 s,72℃延伸30 s,循环32次;72℃延伸10 min;4℃保存.利用优化的反应体系从50对AhMITE引物中筛选出11对多态性
【机 构】
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延边大学农学院,吉林 延吉 133000;吉林省农业科学院花生研究所,吉林 公主岭 136110;吉林省农业科学院花生研究所,吉林 公主岭 136110;延边大学农学院,吉林 延吉 133000
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为了建立适宜不同来源花生种质遗传差异分析的MITE反应体系,本研究从反应体系总量、Taq PCR Mix用量、引物浓度、模板DNA浓度及退火温度、循环次数方面对反应体系进行优化,得到的最佳反应体系为:反应总体积10μL,模板DNA 20 ng,引物(15μmol/L)2μL,Taq PCR Mix 5μL.反应程序为95℃预变性3 min;95℃变性30 s,58℃退火40 s,72℃延伸30 s,循环32次;72℃延伸10 min;4℃保存.利用优化的反应体系从50对AhMITE引物中筛选出11对多态性高的引物,并用于对22份不同来源的花生种质进行遗传多样性分析.结果表明,共扩增出23条带,其中,多态性带21条,多态性比例为91.3％,每个引物平均扩增的多态性带为1.91条.种质间遗传相似系数在0.222～0.957之间,平均值为0.644;通过NTSYS-pc Version 2.1软件基于UPGMA法进行聚类图绘制,在遗传相似系数为0.62时可将22份花生种质分为3大类.表明经过优化的AhMITE反应体系可以有效地用于不同来源花生种质的遗传多样性分析,表现出良好的多态性,可为进一步使用AhMITE标记对花生品种鉴定和遗传图谱构建奠定基础.
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