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摘 要：为探讨MS-222在鱼类运输应激研究中的应用，以黄颡鱼为对象，研究麻醉剂MS-222对运输应激下黄颡鱼肝组织抗氧化系统的影响。结果显示：在运输后0、2、4、8h，MS-222不同浓度处理超氧化物歧化酶（SOD）活性均低于空白对照，丙二醛（MDA）活性总体呈先降低后稳定的趋势，过氧化氢酶（CAT）和还原型谷胱甘肽（GSH）活性均显著高于空白对照。
关键词：黄颡鱼;运输应激;MS-222;生理生化
中图分类号 S942.1 文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2021）05-0067-02
黄颡鱼（Pelteobagrus fulvidraco）又名黄沙古、黄姑子、黄角丁等，隶属于鲶形目（Siluriformes）鲿科（Bagridae）黄颡鱼属（Pelteobagrus），是一种常见的小型淡水经济鱼类[1]。因其肉质富含氨基酸，口味鲜美，营养价值高，无肌间刺，具有药用价值和滋补作用，深受大众的喜爱[2]。然而鱼体死亡或受伤后会导致其营养价值大大降低。运输是水产品从渔场到餐桌的一个重要环节，运输过程中的环境变化如氨氮升高、震荡颠簸、空间狭小、溶解氧不足等因素，均会影响鱼体应激，影响商品鱼的品质及外观，甚至引起死亡，从而导致渔民的经济损失[3]。
麻醉劑具有使机体局部失去知觉的作用，能够麻痹、镇定鱼体，使其减少活动，目前在水产运输、生产、实验等领域应用广泛[4]。间氨基苯甲酸乙酯甲磺酸盐简称MS-222，又名鱼安定、鱼安保等[5]，是一种在渔用上常用的麻醉剂，既安全，效果又理想，在全世界应用广泛[6]。MS-222常采用药液浸泡的方式使用。目前，国内外学者在MS-222对鳜鱼[7]、尼罗罗非鱼[8]、大黄鱼[9]、真鲷[10]、半滑舌鳎[11]等的麻醉方面均有研究，但对黄颡鱼的麻醉运输研究较少。本试验旨在探讨MS-222对黄颡鱼运输过程中的生理生化指标的影响，以进一步了解麻醉剂在黄颡鱼运输应激过程中的影响及作用机制，为调节运输应激提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 试验材料 试验黄颡鱼购自贵州省铜仁市石阡县黄颡鱼养殖场，体长（16.30±0.25）cm，体重（92.80±0.10）g，用曝气48h以上的自来水在温度（20±2）℃、pH7.8±0.2的条件下于实验室暂养，置于自然光照下，游动活泼，体色亮泽，无疾病，无畸形。
1.2 试验方法 采用常规运输办法进行试验。首先在渔用运输塑料袋中装入8L曝气水，每个运输袋随机选取20尾放入其中，待鱼体稳定后加入MS-222。试验设置3个浓度处理和1个空白对照，MS-222的试验浓度分别7、14、21mg/L。每个处理3个重复。随后充入氧气并捆好口袋，将充好氧气的运输袋整齐严实摆放在汽车后备箱中开始运输4h。于运输结束后的第0、2、4、8h每处理随机取出3条试验鱼，解剖，取其肝脏，在预冷的磷酸盐缓冲溶液中漂洗后，滤纸擦干，准确称重，按1∶9（组织重量）加入预冷的磷酸盐缓冲溶液（PBS）（0.1mol/L，pH7.2），冰浴匀浆，将制备好的匀浆液放入冷冻离心机中冷冻离心15min（温度4℃，转速3000r/min），取上清液保存。样品蛋白质含量测定采用考马斯亮蓝法，严格按照试剂盒说明书（南京建成生物工程研究所）操作测定SOD、MDA、GSH、CAT。
1.3 数据处理 数据处理采用Excel 2007和SPSS 13.0统计分析软件，用平均值±标准偏差表示，并进行t检验和差异显著性分析。
2 结果与分析
2.1 MS-222对运输应激下黄颡鱼肝组织SOD酶活性的影响 MS-222对运输应激下黄颡鱼肝组织SOD活性的影响如图1所示。由图1可知，在运输后0、2、4、8h，MS-222不同浓度处理SOD活性均低于空白对照。随着运输后取样时间的增加，不同浓度的处理SOD活性总体呈降低趋势，且差异显著。
2.2 MS-222对运输应激下黄颡鱼肝组织MDA酶活性的影响 MS-222对运输应激下黄颡鱼肝组织MDA活性的影响如图2所示。由图2可知，在运输后0、2、4、8h，MS-222不同浓度处理MDA活性显著高于空白对照，且差异显著。随着运输后取样时间的增加，不同浓度处理的MDA活性总体呈先降低后稳定的趋势，且差异显著。
2.3 MS-222对运输应激下黄颡鱼肝组织CAT酶活性的影响 MS-222对运输应激下黄颡鱼肝组织CAT活性的影响如图3所示。由图3可知，在运输后0、2、4、8h，MS-222不同浓度处理CAT活性均显著高于空白对照，且差异显著。随着运输后取样时间的增加，不同浓度处理的CAT活性总体变化不大。在相同的取样时间下，随着MS-222处理浓度的增加，CAT活性总体表现为先升高后降低的趋势，且差异显著。
2.4 MS-222对运输应激下黄颡鱼肝组织GSH酶活性的影响 MS-222对运输应激下黄颡鱼肝组织GSH活性的影响如图4所示。由图4可知，在运输后0、2、4、8h，MS-222不同浓度处理GSH活性均显著高于空白对照，且差异显著。随着运输后取样时间的增加，7、14、21mg/L的处理GSH活性总体呈下降趋势，且差异显著。
3 结论与讨论
运输应激会使鱼体在此胁迫过程中产生自我防御体系，以抵抗外界环境带来的各种刺激，该反应属于急性应激，在稳定状态时体内的抗氧化系统处于动态平衡。但有研究表明，运输会破换鱼体的抗氧化酶活性，导致免疫力降低[12]，鲫鱼经过震荡后测定其血清中的皮质醇含量，结果显著高于对照组，水平显著高于正常组[13]。
SOD、MDA、GSH、CAT都是重要的抗氧化指标，在鱼类应激中应用广泛。本试验通过利用麻醉剂MS-222降低黄颡鱼活动力度，以降低运输过程中的损失。有学者[14]研究MS-222和丁香酚在大口黑鲈幼鱼运输的应用中发现麻醉剂可以显著降低应激反应，缓解不适，减少机体消耗。高仁法等[5]通过MS-222对鹦鹉鱼的麻醉效果研究也发现，MS-222可以有效降低血液生化水平，减少应激损伤，这与本试验结果一致。本试验中，不同浓度处理SOD活性均低于空白对照，应激使鱼体内产生大量自由基，诱导产生大量SOD以清除自由基，但MS-222不同浓度处理可以降低应激损伤;MDA活性总体呈先降低后稳定的趋势;CAT和GSH活性均显著高于空白对照，表明运输胁迫使黄颡鱼肝组织细胞受到损伤，但MS-222会降低损伤程度，这与刘奇奇等研究结果相似[15]。试验结果表明，MS-222会使运输后鱼体的抗氧化酶活性降低，有效降低了应激反应，为鱼类运输提供了基础数据支撑和发展方向。 参考文献
[1]林丽珍，杜明溪，于琳琳，等.MS-222对黄颡鱼麻醉效果的研究[J].水产科技情报，2019，46（01）：56-60.
[2]张娟，张其中，张占会，等.黄颡鱼HSC70基因及其组织表达分析[J].水生生物学报，2009，33（03）：426-434.
[3]张玉平，刘昊昆，金俊琰，等.模拟运输对异育银鲫血液生理生化指标、体色和肉质的影响[J].水生生物学报，2019，43（01）：86-93.
[4]郝长杰，庄平，赵峰，等.MS-222和丁香酚對暗纹东方鲀幼鱼麻醉效果的比较研究[J].海洋渔业，2019，41（05）：546-554.
[5]高仁法，刘毅，陈书畅，等.MS-222对鹦鹉鱼的麻醉效果研究[J].现代农业科技，2020，（16）：172-174.
[6]王利娟，程守坤，张饮江，等.MS-222在加州鲈鱼模拟运输中的麻醉效果[J].上海海洋大学学报，2015，24（02）：235-241.
[7]郭丰红，汪之和.MS-222对鳜鱼成鱼麻醉效果的研究[J].湖南农业科学，2009（07）：150-153.
[8]汤保贵，张健东，陈刚.MS-222对尼罗罗非鱼的急性毒性及血液指标的影响[A].中国水产学会.2010年中国水产学会学术年会论文摘要集[C].中国水产学会：中国水产学会，2011：1.
[9]张丽，汪之和.MS-222对大黄鱼成鱼麻醉效果的研究[J].湖南农业科学，2010（18）：38-40.
[10]OIKAWA S，TAKEDA T，ITAZAWA Y.Scale effects of MS-222 on a marine teleost，porgy Pagrus major[J].Aquaculture，1994，121（4）：369-379.
[11]刘长琳，陈四清，何力，等.MS-222对半滑舌鳎成鱼的麻醉效果研究[J].中国水产科学，2008（01）：92-99.
[12]尤孝鹏，汪兰，熊光权，等.运输应激对鱼类生理特性和肉质的影响研究进展[J/OL].食品科学：1-8[2020-11-29].http：//kns.cnki.net/kcms/detail/11.2206.TS.20200601.1239.010.html.
[13]王文博.环境胁迫、中草药及基因转植对鱼体非特异性免疫功能的影响[D].北京：中国科学院研究生院（水生生物研究所），2005.
[14]王文豪，董宏标，孙永旭，等.MS-222和丁香酚在大口黑鲈幼鱼模拟运输中的麻醉效果[J].南方水产科学，2018，14（06）：52-58.
[15]刘奇奇，温久福，区又君，等.塑料袋包装充氧运输胁迫对四指马鲅幼鱼抗氧化系统的影响及抗应激剂的作用[J].动物学杂志，2018，53（01）：82-91.
（责编：徐世红）
关键词：黄颡鱼;运输应激;MS-222;生理生化
中图分类号 S942.1 文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2021）05-0067-02
黄颡鱼（Pelteobagrus fulvidraco）又名黄沙古、黄姑子、黄角丁等，隶属于鲶形目（Siluriformes）鲿科（Bagridae）黄颡鱼属（Pelteobagrus），是一种常见的小型淡水经济鱼类[1]。因其肉质富含氨基酸，口味鲜美，营养价值高，无肌间刺，具有药用价值和滋补作用，深受大众的喜爱[2]。然而鱼体死亡或受伤后会导致其营养价值大大降低。运输是水产品从渔场到餐桌的一个重要环节，运输过程中的环境变化如氨氮升高、震荡颠簸、空间狭小、溶解氧不足等因素，均会影响鱼体应激，影响商品鱼的品质及外观，甚至引起死亡，从而导致渔民的经济损失[3]。
麻醉劑具有使机体局部失去知觉的作用，能够麻痹、镇定鱼体，使其减少活动，目前在水产运输、生产、实验等领域应用广泛[4]。间氨基苯甲酸乙酯甲磺酸盐简称MS-222，又名鱼安定、鱼安保等[5]，是一种在渔用上常用的麻醉剂，既安全，效果又理想，在全世界应用广泛[6]。MS-222常采用药液浸泡的方式使用。目前，国内外学者在MS-222对鳜鱼[7]、尼罗罗非鱼[8]、大黄鱼[9]、真鲷[10]、半滑舌鳎[11]等的麻醉方面均有研究，但对黄颡鱼的麻醉运输研究较少。本试验旨在探讨MS-222对黄颡鱼运输过程中的生理生化指标的影响，以进一步了解麻醉剂在黄颡鱼运输应激过程中的影响及作用机制，为调节运输应激提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 试验材料 试验黄颡鱼购自贵州省铜仁市石阡县黄颡鱼养殖场，体长（16.30±0.25）cm，体重（92.80±0.10）g，用曝气48h以上的自来水在温度（20±2）℃、pH7.8±0.2的条件下于实验室暂养，置于自然光照下，游动活泼，体色亮泽，无疾病，无畸形。
1.2 试验方法 采用常规运输办法进行试验。首先在渔用运输塑料袋中装入8L曝气水，每个运输袋随机选取20尾放入其中，待鱼体稳定后加入MS-222。试验设置3个浓度处理和1个空白对照，MS-222的试验浓度分别7、14、21mg/L。每个处理3个重复。随后充入氧气并捆好口袋，将充好氧气的运输袋整齐严实摆放在汽车后备箱中开始运输4h。于运输结束后的第0、2、4、8h每处理随机取出3条试验鱼，解剖，取其肝脏，在预冷的磷酸盐缓冲溶液中漂洗后，滤纸擦干，准确称重，按1∶9（组织重量）加入预冷的磷酸盐缓冲溶液（PBS）（0.1mol/L，pH7.2），冰浴匀浆，将制备好的匀浆液放入冷冻离心机中冷冻离心15min（温度4℃，转速3000r/min），取上清液保存。样品蛋白质含量测定采用考马斯亮蓝法，严格按照试剂盒说明书（南京建成生物工程研究所）操作测定SOD、MDA、GSH、CAT。
1.3 数据处理 数据处理采用Excel 2007和SPSS 13.0统计分析软件，用平均值±标准偏差表示，并进行t检验和差异显著性分析。
2 结果与分析
2.1 MS-222对运输应激下黄颡鱼肝组织SOD酶活性的影响 MS-222对运输应激下黄颡鱼肝组织SOD活性的影响如图1所示。由图1可知，在运输后0、2、4、8h，MS-222不同浓度处理SOD活性均低于空白对照。随着运输后取样时间的增加，不同浓度的处理SOD活性总体呈降低趋势，且差异显著。
2.2 MS-222对运输应激下黄颡鱼肝组织MDA酶活性的影响 MS-222对运输应激下黄颡鱼肝组织MDA活性的影响如图2所示。由图2可知，在运输后0、2、4、8h，MS-222不同浓度处理MDA活性显著高于空白对照，且差异显著。随着运输后取样时间的增加，不同浓度处理的MDA活性总体呈先降低后稳定的趋势，且差异显著。
2.3 MS-222对运输应激下黄颡鱼肝组织CAT酶活性的影响 MS-222对运输应激下黄颡鱼肝组织CAT活性的影响如图3所示。由图3可知，在运输后0、2、4、8h，MS-222不同浓度处理CAT活性均显著高于空白对照，且差异显著。随着运输后取样时间的增加，不同浓度处理的CAT活性总体变化不大。在相同的取样时间下，随着MS-222处理浓度的增加，CAT活性总体表现为先升高后降低的趋势，且差异显著。
2.4 MS-222对运输应激下黄颡鱼肝组织GSH酶活性的影响 MS-222对运输应激下黄颡鱼肝组织GSH活性的影响如图4所示。由图4可知，在运输后0、2、4、8h，MS-222不同浓度处理GSH活性均显著高于空白对照，且差异显著。随着运输后取样时间的增加，7、14、21mg/L的处理GSH活性总体呈下降趋势，且差异显著。
3 结论与讨论
运输应激会使鱼体在此胁迫过程中产生自我防御体系，以抵抗外界环境带来的各种刺激，该反应属于急性应激，在稳定状态时体内的抗氧化系统处于动态平衡。但有研究表明，运输会破换鱼体的抗氧化酶活性，导致免疫力降低[12]，鲫鱼经过震荡后测定其血清中的皮质醇含量，结果显著高于对照组，水平显著高于正常组[13]。
SOD、MDA、GSH、CAT都是重要的抗氧化指标，在鱼类应激中应用广泛。本试验通过利用麻醉剂MS-222降低黄颡鱼活动力度，以降低运输过程中的损失。有学者[14]研究MS-222和丁香酚在大口黑鲈幼鱼运输的应用中发现麻醉剂可以显著降低应激反应，缓解不适，减少机体消耗。高仁法等[5]通过MS-222对鹦鹉鱼的麻醉效果研究也发现，MS-222可以有效降低血液生化水平，减少应激损伤，这与本试验结果一致。本试验中，不同浓度处理SOD活性均低于空白对照，应激使鱼体内产生大量自由基，诱导产生大量SOD以清除自由基，但MS-222不同浓度处理可以降低应激损伤;MDA活性总体呈先降低后稳定的趋势;CAT和GSH活性均显著高于空白对照，表明运输胁迫使黄颡鱼肝组织细胞受到损伤，但MS-222会降低损伤程度，这与刘奇奇等研究结果相似[15]。试验结果表明，MS-222会使运输后鱼体的抗氧化酶活性降低，有效降低了应激反应，为鱼类运输提供了基础数据支撑和发展方向。 参考文献
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[11]刘长琳，陈四清，何力，等.MS-222对半滑舌鳎成鱼的麻醉效果研究[J].中国水产科学，2008（01）：92-99.
[12]尤孝鹏，汪兰，熊光权，等.运输应激对鱼类生理特性和肉质的影响研究进展[J/OL].食品科学：1-8[2020-11-29].http：//kns.cnki.net/kcms/detail/11.2206.TS.20200601.1239.010.html.
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[15]刘奇奇，温久福，区又君，等.塑料袋包装充氧运输胁迫对四指马鲅幼鱼抗氧化系统的影响及抗应激剂的作用[J].动物学杂志，2018，53（01）：82-91.
（责编：徐世红）