【摘 要】
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目的观察碱性成纤维细胞生长因子(b FGF)对兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)向成骨细胞分化的影响,并探讨其最佳作用浓度。方法采用体外全血贴壁法培养兔BMSCs,进行表面抗原(CD29、
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目的观察碱性成纤维细胞生长因子(b FGF)对兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)向成骨细胞分化的影响,并探讨其最佳作用浓度。方法采用体外全血贴壁法培养兔BMSCs,进行表面抗原(CD29、CD44、CD45,采用流式细胞术)及成软骨(HE染色和阿尔新蓝染色)、成骨[茜素红染色及碱性磷酸酶(ALP)染色]分化潜能鉴定。取第2代BMSCs,加入含0、1、5、10、50、100 ng/m L b FGF的成骨诱导液,分别于培养第4、7、10、14天采用PNP比色法检测ALP表达,采用放射免疫分析法检测骨钙素(OC)表达。结果细胞表面抗原CD29阳性表达率为92.23%,CD44阳性表达率为80.01%,CD45阳性表达率为1.91%;HE染色见细胞形态为多角形或多边形,有多个凸起,核周细胞质内可见黑色颗粒,阿尔新蓝染色可见细胞间大量天蓝色物质弥漫分布;茜素红染色可见大量红色钙结节,ALP染色可见细胞质中出现棕褐色的颗粒和块状沉淀;证实分离培养的细胞为BMSCs,并具有成软骨和成骨分化潜能。随着作用时间的延长,BMSCs经不同浓度b FGF作用后ALP及OC表达均呈升高趋势。相同作用时间下,BMSCs经50 ng/m L b FGF作用后ALP及OC表达均高于0、1、5、10、100 ng/m L b FGF作用后(P均<0.01)。结论 b FGF能促进BMSCs向成骨细胞分化,并呈时间依赖性;其最佳作用浓度为50 ng/m L。
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