【摘 要】
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目的将水蛭素基因转入酵母系统中进行表达,以评价人工合成基因在真核系统中表达的可行性和探讨影响表达水平的因素.方法根据水蛭素变异体1(HV1)的氨基酸序列,选择酿酒酵母偏
【机 构】
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中国医学科学院中国协和医科大学医学生物学研究所
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目的将水蛭素基因转入酵母系统中进行表达,以评价人工合成基因在真核系统中表达的可行性和探讨影响表达水平的因素.方法根据水蛭素变异体1(HV1)的氨基酸序列,选择酿酒酵母偏爱的密码子,设计了HV1基因.将HV1基因分12个寡核苷酸片段,进行人工合成,并连接成一个完整的水蛭素基因.经PCR扩增后,将扩增产物连到克隆载体pBS-SK(+)上并进行DNA序列分析.用正确的HV1基因与酵母α因子信号肽基因相连,并一起插入酵母表达载体pYC-DE,经鉴定表明,获得正确的重组表达质粒.将后者转入酿酒酵母BJ1990细胞进行初步表达.结果在筛选出的阳性克隆的培养上清中,检测出的水蛭素活性为30抗凝血酶单位(ATU)/ml.所表达的量高于HV2在酵母中和HV1在原核系统的表达水平.N末端氨基酸序列与天然水蛭素一致.结论采用人工合成的HV1基因和较强的启动子在酵母中进行表达是一较好途径.
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