【摘 要】
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目的构建编码弓形虫RH株表面抗原P30基因的分枝杆菌-大肠杆菌穿梭表达重组质粒并进行其序列测定.方法弓形虫RH株腹腔接种小鼠,收集腹水,酚/ 氯仿法抽提基因组DNA;根据基因库P
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目的构建编码弓形虫RH株表面抗原P30基因的分枝杆菌-大肠杆菌穿梭表达重组质粒并进行其序列测定.方法弓形虫RH株腹腔接种小鼠,收集腹水,酚/ 氯仿法抽提基因组DNA;根据基因库P30 基因序列设计合成一对引物,采用PCR法扩增编码P30的基因片段,经低熔点琼脂糖法回收并纯化;将P30基因定向克隆到分枝杆菌-大肠杆菌穿梭表达质粒,转化大肠杆菌DH5dα,在卡那霉素阳性LB培养基平板筛选阳性重组子,并经双酶切及PC R 鉴定;最后对重组子进行序列测定.结果 PCR所扩增的P30基因片段为1037bp, 阳性重组质粒pBCG-P30经XbaI+KpnI双酶切,获得包含P30和热休克蛋白(hsp70)启动子的复合基因片段,此片段的大小为1170bp,与预期的理论值相符合.序列测定分析进一步表明所克隆的基因为编码P30抗原的基因片段.结论成功构建编码弓形虫表面抗原P30基因大肠杆菌-分枝杆菌穿梭质粒pBCG-P30.
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