黑曲霉寡肽酶YpsA的生化特征解析

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寡肽酶参与蛋白质水解的后期过程,对制备不同水解度的功能性寡肽具有重要应用价值。该文从黑曲霉中克隆并鉴定出一种新蛋白水解酶YpsA,由492个氨基酸残基组成,N-端含有由18个氨基酸残基组成的典型Sec信号肽序列,其一级结构特征与天冬氨酸蛋白酶高度相似,但与已被功能鉴定的天冬氨酸蛋白酶相似度最高仅为33.05%。进一步对其编码基因进行克隆、表达与制备。所获得的重组YpsA在40 ℃和pH 7.0下表现出最高酶活;天冬氨酸蛋白酶特异性抑制剂抑肽素对其具有强烈抑制作用,而PMSF、E-64和EDTA对其无抑制活性;该酶对所测试的5种寡肽底物呈现较高水解活性,但对大分子的蛋白底物和中分子量的多肽底物的水解活性皆较低。可见,YpsA是一种新型的对寡肽底物具有水解偏好性的中性天冬氨酸寡肽酶,在对产物分子量范围有特定要求的蛋白质生物加工中具有潜在应用价值。
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