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[背景]抗性基因(Resistance Gene)在分子生物学研究中具有重要作用,但其基因片段较大,限制了载体中插入目的序列的长度.[目的]探究分子量较小的RNA适配体的类抗性基因作用,用于优化载体载量和扩展目的基因片段.[方法]基于tRNA支架在体内富集表达RNA适配体,筛选验证氨基糖苷类抗生素新霉素B的RNA适配体的抗性作用.[结果]构建tRNA支架重组RNA表达载体并进行体内筛选,得到A Site和Avirus这2个RNA适配体分子,能够耐受新霉素B浓度为19 μg/mL(固体培养基)和30 μg/mL(液体培养基).[结论]RNA适配体可发挥类抗性基因的功能,本文策略有望用于抗性基因的优化,缩小质粒载体载量,为分子克隆技术提供新的手段.