siRNA靶向Her-2逆转录病毒载体构建及其在SKOV3中的表达

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目的构建并鉴定Her-2特异性siRNA逆转录病毒载体,将其导入SKOV3卵巢癌细胞中,并初步筛选有效抑制Her-2表达的细胞株。方法体外合成含针对Her-2特异基因序列的寡核苷酸并定向克隆入逆转录病毒载体RNAi—Ready pSIREN—RetroQ,构建的载体通过测序、酶切鉴定后,脂质体介导下转染到包装病毒细胞株PT67中,嘌呤霉素筛选并挑选细胞克隆,收获病毒上清,将病毒上清转染SKOV3中,经过嘌呤霉素筛选得到稳定抑制Her-2表达的SKOV3细胞株,并分别通过RT-PCR和免疫组化方法鉴定抑制H
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