【摘 要】
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为构建表达弓形虫抗原的重组猫疱疹病毒Ⅰ型(FHV-1)转移载体,本研究以pBluescipt Ⅱ-SK(-)为骨架载体,分别插入FHV-1 TK基因的5’(2 000 bp)和3’(1 700 bp)同源臂、pCAGGs载
【机 构】
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延边大学农学院动物医学系,中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室-美国密西根州立大学天然免疫联合实验室,吉林农业大学动物医学院,东北农业大学动物医学院
【基金项目】
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兽医生物技术国家重点实验室基本科研业务费项目;
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为构建表达弓形虫抗原的重组猫疱疹病毒Ⅰ型(FHV-1)转移载体,本研究以pBluescipt Ⅱ-SK(-)为骨架载体,分别插入FHV-1 TK基因的5’(2 000 bp)和3’(1 700 bp)同源臂、pCAGGs载体中含有启动子和终止信号的表达盒以及弓形虫RH株SAG1或GRA4基因,构建重组FHV-1的转移载体pBS-TK-SAG1和pBS-TK-GRA4.将其分别转染于293T细胞,通过原核细胞表达的截短SAG1和GRA4重组蛋白制备的鼠多克隆抗体进行westernblot鉴定.结果显示,制备的弓形虫SAG1和GRA4多克隆抗体能够特异性识别重组表达和虫体表达的天然的SAG1和GRA4两种弓形虫蛋白,分子量一致,分别为35 ku和45 ku.本研究为表达弓形虫RH株SAG1和GRA4基因的猫重组疱疹病毒Ⅰ型载体疫苗的研制奠定了基础.
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