【摘 要】
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目的:观察扶正化瘀方对肝纤维化背景小鼠模型肝癌发生的影响，及其调节肝脏衰老肿瘤相关成纤维细胞与肝星状细胞的相关作用机制。方法:采用二乙基亚硝胺（DEN）联合四氯化碳（CCl4）诱导24周建立C57BL/6小鼠肝癌模型，自造模12周肝纤维化明显时给予扶正化瘀方灌胃至24周。观察模型组18周、24周和扶正化瘀方组小鼠肝组织形态变化、肿瘤数量；免疫组织化学法检测Ki67表达，荧光定量PCR测定Afp、G
【机 构】
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上海中医药大学附属曙光医院肝病研究所
【基金项目】
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2018年上海中医健康服务协同创新中心第三批开放项目（No:ZYJKFW201811013）； 上海市临床重点专科建设项目（No:shslczdzk01201）； 国家自然科学基金项目（No:81730109）；
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目的:观察扶正化瘀方对肝纤维化背景小鼠模型肝癌发生的影响，及其调节肝脏衰老肿瘤相关成纤维细胞与肝星状细胞的相关作用机制。方法:采用二乙基亚硝胺（DEN）联合四氯化碳（CCl4）诱导24周建立C57BL/6小鼠肝癌模型，自造模12周肝纤维化明显时给予扶正化瘀方灌胃至24周。观察模型组18周、24周和扶正化瘀方组小鼠肝组织形态变化、肿瘤数量；免疫组织化学法检测Ki67表达，荧光定量PCR测定Afp、Gpc3基因水平；天狼猩红染色观察肝组织胶原沉积；免疫组织化学染色检测α-SMA、成纤维细胞活化蛋白FAP表达；半乳糖苷酶染色、γ-H2AX、FOXO4免疫组织化学染色检测细胞衰老；蛋白印迹法检测肝组织α-SMA、FAP、γ-H2AX、FOXO4蛋白表达。结果:随造模时间延长，小鼠肝癌发生率增加，模型组24周肝癌发生率为100%;肝组织胶原沉积增多，α-SMA表达逐渐增加；汇管区及胶原沉积周围可见FAP阳性表达的肿瘤相关成纤维细胞，同时该处SA-β-Gal、γ-H2AX、FOXO4阳性表达显著增多（P＜0.05）,且FAP、γ-H2AX及FOXO4蛋白表达量随造模时间延长而增加。模型组24周肿瘤组织周围衰老的肿瘤相关成纤维细胞明显增多（P＜0.05）。与模型组比较，扶正化瘀方组肿瘤发生明显减少（P＜0.05）,肝组织胶原沉积及α-SMA阳性染色及蛋白表达量减少；SA-β-Gal、FAP、γ-H2AX、FOXO4阳性表达减少（P＜0.05）,FAP、γ-H2AX及FOXO4蛋白表达水平显著降低，肿瘤周围衰老的成纤维细胞明显减少（P＜0.05）。结论:DEN复合CCl4诱导小鼠模型具有从肝纤维化到肝癌的病变特点，肿瘤周围衰老成纤维细胞增多；扶正化瘀方可减少肝纤维化背景小鼠肝癌的发生，其机制与抑制肝星状细胞活化和肝纤维化、减少肿瘤周围衰老成纤维细胞相关。
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