【摘 要】
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目的 探讨丹酚酸A(SAA)对血管内皮细胞低氧损伤后体外血管新生能力的作用及其机制.方法 采用氧糖剥夺(OGD)的方法构建人脑微血管内皮细胞(HBMEC)缺氧损伤模型,CCK-8法检测OGD 2,4,6,8和10 h细胞存活率,确定OGD时间.HBMEC分为细胞对照组、OGD组、OGD+SAA 0.3,1.0和3.0μmol·L-1组及OGD+依达拉奉10μmol·L-1组,OGD 6 h后,用CCK-8法检测细胞存活率;Matrigel管腔形成实验观察OGD 2～10 h管腔形成;OGD 6 h后,检测
【机 构】
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中国医学科学院北京协和医学院药物研究所,药物靶点研究与新药筛选北京市重点实验室,北京 100050;中国医学科学院北京协和医学院药物研究所,药物靶点研究与新药筛选北京市重点实验室,北京 100050;
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目的 探讨丹酚酸A(SAA)对血管内皮细胞低氧损伤后体外血管新生能力的作用及其机制.方法 采用氧糖剥夺(OGD)的方法构建人脑微血管内皮细胞(HBMEC)缺氧损伤模型,CCK-8法检测OGD 2,4,6,8和10 h细胞存活率,确定OGD时间.HBMEC分为细胞对照组、OGD组、OGD+SAA 0.3,1.0和3.0μmol·L-1组及OGD+依达拉奉10μmol·L-1组,OGD 6 h后,用CCK-8法检测细胞存活率;Matrigel管腔形成实验观察OGD 2～10 h管腔形成;OGD 6 h后,检测管腔节点数、网眼数、分支数以及管腔长度;EdU掺入实验检测细胞增殖,划痕实验检测细胞迁移距离.HBMEC分为细胞对照组、OGD组、OGD+SAA 3.0μmol·L-1组和OGD+依达拉奉10μmol·L-1组,OGD 6 h后,Western印迹实验检测低氧诱导因子1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子A(VEGFA)及其受体VEGFR2蛋白表达水平及磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/mTOR)信号通路蛋白磷酸化水平.结果 OGD 6 h细胞存活率为(56±6)％,确定为后续OGD时间.与细胞对照组相比,OGD组细胞存活率明显降低,形成管腔的节点数、网眼数、分支数以及管腔长度均显著减少(P<0.01,P<0.05),EdU阳性细胞比例和细胞迁移距离也明显下降(P<0.01).与OGD组相比,OGD+SAA 3.0μmol·L-1组和OGD+依达拉奉10μmol·L-1组细胞存活率明显提高(P<0.05),形成管腔的节点数、网眼数、分支数以及管腔长度均显著升高(P<0.01,P<0.05),EdU阳性细胞比例和细胞迁移距离也明显增加(P<0.01,P<0.05);Western印迹结果显示,与OGD组相比,OGD+SAA 3.0μmol·L-1组HIF-1α,VEGFA和VEGFR2蛋白表达显著增加(P<0.01,P<0.05),PI3K,Akt和mTOR磷酸化水平明显升高(P<0.05).结论 SAA可能通过激活HIF-1α/VEGFA/VEGFR2及其下游信号通路PI3K/Akt/mTOR发挥内皮细胞保护和促进血管生成的作用.
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