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两步酶消化法制备新生牛生精上皮细胞悬液，分离纯化、鉴定精原干细胞和支持细胞，冷冻保存支持细胞。以支持细胞为饲养层探索不同培养条件下精原干细胞的增殖情况，免疫组化鉴定。结果表明：10％DMSO与0．1mol／L的海藻糖组合作为冷冻保护剂，冷冻效果较好；血清浓度为2．5％、支持细胞密度为5×10^5个／mL时，新生牛精原干细胞较易形成集落；精原干细胞及其集落的AKP染色和c—kit免疫组化均呈阳性。