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摘要：目的优选葛黄颗粒乙醇渗漉工艺。方法以乙醇提取物中有效成分鸢尾苷含量为指标，通过单因素试验比较乙醇渗漉法、乙醇超声法和乙醇回流法，确定葛黄颗粒中醇提药材的提取方法；运用高效液相色谱法，使用正交设计法，优选葛黄颗粒乙醇提取工艺。结果采用乙醇渗漉法提取，最佳工艺为：8倍量60%乙醇，浸泡12h，流速为1mL·min-1。结论采用该渗漉工艺提取，葛黄颗粒乙醇提取物中鸢尾苷的收率较高且稳定。
关键词：渗漉；正交设计；鸢尾苷；高效液相色谱法；葛黄颗粒
中图分类号：R283文献标志码：A文章编号：1007-2349（2018）01-0069-03
【Abstract】Objective： To optimize the process of ethanol percolation in Gehuang Granule. Methods： By taking the content of tectoridin in the ethanol extract as an index and by single factor test， ethanol percolation method， ethanol ultrasonic method and ethanol reflux method were compared to determine the extraction method of alcohol extraction medicinal material in Gezhong granule. By using HPLC and orthogonal design method， the ethanol extraction process of Gezhong Granule was optimized . Results： The best extraction process was ethanol percolation method. The optimum conditions were as follows， 8 times the amount of 60% ethanol， soaking for 12 hours， with 1mL·min-1 of flow rate. Conclusion： According to the percolation process， the yield of tectoridin of ethanol percolation in Gehuang Granule is high and stable.
【Key words】percolation， orthogonal design， tectoridin， HPLC， Gehuang Granules
葛黃颗粒是本院自制的复方中药制剂，具有醒酒解毒、健脾疏肝、清热利湿之功效。处方中有葛花、丹参，主要成分为鸢尾苷、丹参酮ⅡA等脂溶性成分。现代药理研究表明，葛花中所含的鸢尾苷等异黄酮类化合物具有解酒保肝的作用，可使血中乙醇、乙醛浓度下降，以及降低血尿素氮的升高，从而起到解酒作用。鸢尾苷等异黄酮类成分易溶于乙醇。为最大限度地提取方中有效成分，充分发挥解酒、保肝的功效，本实验以鸢尾苷含量为指标，通过单因素试验比较乙醇渗漉法、乙醇超声法和乙醇回流法对葛黄颗粒中有效成分含量的影响，筛选最佳提取方法，并通过正交设计优选最佳乙醇渗漉工艺。
1材料
仪器与材料：HH—S8水浴锅；JA203H天平；AUW120D精密天平；JPCT0328超声机；LC-20AT高效液相色谱仪（日本岛津公司），SPD-20A紫外可见检测器，LCsolution色谱工作站。鸢尾苷对照品（中国食品药品检定研究院提供，供鉴别用，批号：111632-200602，供含量测定用）。葛花、丹参均购于泸州市宝光中药饮片公司，经西南医科大学庄诚教授鉴定，均符合《中国药典》2015年版相关项下要求。乙腈、甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯。
2方法与结果
2.1色谱条件及系统适用性试验色谱柱：Wonda Sil C18-WR（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈-0.2%磷酸水（20∶80）；流速：1 mL·min-1，检测波长：265 nm，柱温：40℃，理论塔板数按鸢尾苷计算应不低于4000。
2.2对照品溶液的制备精密称取鸢尾苷对照品1.24 mg，置10 mL棕色量瓶中，加入甲醇超声溶解并定容，即得对照品溶液。
2.3标准曲线的制备依次精密吸取鸢尾苷对照品溶液2.5、5、10、15、20 μL注入液相色谱仪，测定。以峰面积（A）为纵坐标（Y），进样量（mg）为横坐标（X），绘制标准曲线，得到回归方程：Y=4537.6X-5486，r=0.9998（n=5）。见表1和图1～3。
2.4提取方法比较取葛花、丹参粉碎成粗颗粒（过20目筛），各精密称取单倍处方量3份，混匀。
2.4.1乙醇渗漉法取1份粗颗粒，加适量60%乙醇浸润30 min，取脱脂棉一团垫在渗漉筒底部铺平，装筒，加入20倍量60%乙醇，加盖密闭24 h，以1～3 mL·min-1流速进行渗漉，收集渗漉液，减压浓缩至适量，恒温干燥，得提取物1。
2.4.2乙醇超声法取1份粗颗粒，置烧瓶中，加入20倍量60%乙醇浸泡30 min，超声提取2次，每次1 h，过滤，合并滤液，减压浓缩至适量，恒温干燥，得提取物2。
2.4.3乙醇回流法取1份粗颗粒，置磨口烧瓶中，加20倍量60%乙醇浸泡30 min，加热回流提取2次，每次1 h，放冷，滤过，收集滤液减压浓缩至适量，恒温干燥，得提取物3。
2.5供试品溶液的制备分别取提取物各0.25 g，精密称定，加入75%乙醇25 mL，密塞，称定重量，超声提取40 min，取出，放冷，补足重量，滤过，取续滤液，过0.45 μm滤膜，滤过，即得。
关键词：渗漉；正交设计；鸢尾苷；高效液相色谱法；葛黄颗粒
中图分类号：R283文献标志码：A文章编号：1007-2349（2018）01-0069-03
【Abstract】Objective： To optimize the process of ethanol percolation in Gehuang Granule. Methods： By taking the content of tectoridin in the ethanol extract as an index and by single factor test， ethanol percolation method， ethanol ultrasonic method and ethanol reflux method were compared to determine the extraction method of alcohol extraction medicinal material in Gezhong granule. By using HPLC and orthogonal design method， the ethanol extraction process of Gezhong Granule was optimized . Results： The best extraction process was ethanol percolation method. The optimum conditions were as follows， 8 times the amount of 60% ethanol， soaking for 12 hours， with 1mL·min-1 of flow rate. Conclusion： According to the percolation process， the yield of tectoridin of ethanol percolation in Gehuang Granule is high and stable.
【Key words】percolation， orthogonal design， tectoridin， HPLC， Gehuang Granules
葛黃颗粒是本院自制的复方中药制剂，具有醒酒解毒、健脾疏肝、清热利湿之功效。处方中有葛花、丹参，主要成分为鸢尾苷、丹参酮ⅡA等脂溶性成分。现代药理研究表明，葛花中所含的鸢尾苷等异黄酮类化合物具有解酒保肝的作用，可使血中乙醇、乙醛浓度下降，以及降低血尿素氮的升高，从而起到解酒作用。鸢尾苷等异黄酮类成分易溶于乙醇。为最大限度地提取方中有效成分，充分发挥解酒、保肝的功效，本实验以鸢尾苷含量为指标，通过单因素试验比较乙醇渗漉法、乙醇超声法和乙醇回流法对葛黄颗粒中有效成分含量的影响，筛选最佳提取方法，并通过正交设计优选最佳乙醇渗漉工艺。
1材料
仪器与材料：HH—S8水浴锅；JA203H天平；AUW120D精密天平；JPCT0328超声机；LC-20AT高效液相色谱仪（日本岛津公司），SPD-20A紫外可见检测器，LCsolution色谱工作站。鸢尾苷对照品（中国食品药品检定研究院提供，供鉴别用，批号：111632-200602，供含量测定用）。葛花、丹参均购于泸州市宝光中药饮片公司，经西南医科大学庄诚教授鉴定，均符合《中国药典》2015年版相关项下要求。乙腈、甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯。
2方法与结果
2.1色谱条件及系统适用性试验色谱柱：Wonda Sil C18-WR（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈-0.2%磷酸水（20∶80）；流速：1 mL·min-1，检测波长：265 nm，柱温：40℃，理论塔板数按鸢尾苷计算应不低于4000。
2.2对照品溶液的制备精密称取鸢尾苷对照品1.24 mg，置10 mL棕色量瓶中，加入甲醇超声溶解并定容，即得对照品溶液。
2.3标准曲线的制备依次精密吸取鸢尾苷对照品溶液2.5、5、10、15、20 μL注入液相色谱仪，测定。以峰面积（A）为纵坐标（Y），进样量（mg）为横坐标（X），绘制标准曲线，得到回归方程：Y=4537.6X-5486，r=0.9998（n=5）。见表1和图1～3。
2.4提取方法比较取葛花、丹参粉碎成粗颗粒（过20目筛），各精密称取单倍处方量3份，混匀。
2.4.1乙醇渗漉法取1份粗颗粒，加适量60%乙醇浸润30 min，取脱脂棉一团垫在渗漉筒底部铺平，装筒，加入20倍量60%乙醇，加盖密闭24 h，以1～3 mL·min-1流速进行渗漉，收集渗漉液，减压浓缩至适量，恒温干燥，得提取物1。
2.4.2乙醇超声法取1份粗颗粒，置烧瓶中，加入20倍量60%乙醇浸泡30 min，超声提取2次，每次1 h，过滤，合并滤液，减压浓缩至适量，恒温干燥，得提取物2。
2.4.3乙醇回流法取1份粗颗粒，置磨口烧瓶中，加20倍量60%乙醇浸泡30 min，加热回流提取2次，每次1 h，放冷，滤过，收集滤液减压浓缩至适量，恒温干燥，得提取物3。
2.5供试品溶液的制备分别取提取物各0.25 g，精密称定，加入75%乙醇25 mL，密塞，称定重量，超声提取40 min，取出，放冷，补足重量，滤过，取续滤液，过0.45 μm滤膜，滤过，即得。